蜂花粉多酶体破壁的中试工艺研究

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1、万方数据福建中医学院学报2009年12月第19卷第6期JournalofFujianUniversityofTCMDecember2009，19(6)蜂花粉多酶体破壁的中试工艺研究杨义雄，王宫，林海(福建省中医药研究院，福建福州350003)关键词：蜂花粉；多酶体；破壁；中试中图分类号：R283文献标识码：B文章编号：1004—5627(2009)06—0026—01蜂花粉细胞壁结构致密，口服营养成分不易被人体吸收，因此多需破壁后服用，并由此衍生出诸多花粉破壁方法．包括机械破壁法、酶解破壁法、微波、微生物发酵、

2、温差等破壁方法⋯，但每种方法均或多或少存在一些不足之处。本课题组在先前研究中．根据蜂花粉的细胞特征。采用多种生物酶混合的多酶体系对蜂花粉进行酶解破壁，筛选出了实验室条件下的蜂花粉破壁条件[21，现在此研究的基础之上．对其进行中试工艺的研究。1仪器和材料酶介罐(温州东亚制药装备制造有限公司，500L)；热风循环烘箱(常州市五玉机械有限公司，CT—C—II型)；分析天平(上海奥豪斯国际贸易有限公司，AR2140)；雷磁pH计(上海楚柏实验室设备有限公司，PHS一3C型)，显微镜(日本奥林巴斯光学工业公司。CX40型

3、)。油菜蜂花粉由福建农林大学提供；纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶活性单位20000U／g．由福州福达生物工程有限公司提供。水为蒸馏水。2方法与结果2．1破壁率测定方法吸取适量花粉酶解后的混悬液滴在血球计数板上，在显微镜下观察记数。2．2中试规模破壁工艺考察利用搅拌转速可调的酶介罐进行中试，用正交试验法考察在中试规模下酶解时间、加水量及搅拌转速对破壁率的影响．优选出最佳的中试工艺条件。2．2．1正交试验设计与结果称取蜂花粉40kg，在小试中筛选出的最佳酶配比，即纤维素酶1．5％、果胶酶0．2％、木聚糖酶l％，以及最佳

4、温度50℃。最佳pH5．0的条件下，按三因素三水平正交原理，在酶介罐中进行实验，因素和水平见表1。以破壁率为考察指标，结果见表2。收稿日期：2009—09—02基金项目：福建省科技合作重点项只(200610029)作者简介：杨义雄(19r72一)，男，实验师。主要从事中药化学成分的研究。表1k(34)因素和水平表水平A(时间)／hB(加水量)／倍C(搅拌转速)／rD(空列)2．2．2正交试验分析与结论从正交实验结果的直观分析中可以看出各因素对蜂花粉破壁率的影响程度为12>A>B，最佳工艺条件为A383C3；对正

5、交实验的结果进行方差分析后发现。因素C各水平间有显著性差异，P<0．05；而因素A、B各水平间无显著性差异。从生产效率及便于操作的角度出发，选择A。B。C，为蜂花粉复合酶解破壁生产的最佳工艺，即在纤维素酶用量1．5％、果胶酶用量0．2％、木聚糖酶用量1．O％、酶解pH5．0、酶解温度50℃的条件下．加1倍水量，搅拌转速40r·m～，酶解时间5h。方差分析见表3。2．2．3验证实验进行3次验证实验测得的平均(下转第29页)万方数据第6期陈芳等：筋骨草抗炎有效部位及其量效关系研究29AjugaDecumbensTh

6、unbanditsdose-effectrelationCHENFang，LIXJao-dong。W1JFu-huo(DepartmentofPharmacy，FUTCM，Fuzhou，FujJan350108，China)ABSTRACT：ObjectivesTostudyontheanti-inflammatoryactivepartofAjugadecumbensThunbanditsdose—effectrelation．MethodsUsingwater—decoctedmethod，thedecoc

7、tionofAiugadecumbensThunbwasobtained．necompositionofAjugadecumbensThunbabsorbedbymacroporousresininacolumnwereelutedwithdistilledwaterandethanolrespectively．AftertheeffectsofcondensedextractionsfromthedecoctionandmacroporousethanolelutionOUtwoinflammatorymod

8、els，suchastheswellingoftheeafflapsofmiceinducedbyxyleneandthegranulomainducedbyagarwheninjectingitintoabdominalcavityofmicewereobserved，activepartofAjugadecumbensThunbwasprimarilydeterminedandit