番木瓜中木瓜蛋白酶的提取工艺研究

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1、ThestudyofextractionprocessofpapalninDaDaVaIVATheSiSSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgricultureProductProcessingandStorage1n●tmglneermg一ByWanJingPostgraduateProgramCollegeofFoodScienceandTechnologyHainanUniversitySupervisor：ZhangHaideAcademicTi

2、tle：ProfessorSignatureApprovedJune．2010￡j嬲嬲炒海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：万硪日期：痧7睥多月吕El学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或

3、机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海南大学。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：日期：矿叼卫年易月吕日导师签名：1版么慰、日期．叫。年多月孑日●●●●●●●●●●●●●●●●●●●o●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●

4、●●●本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程’’，同意将本人的学位论文提交“CALIS高校学位论文全文数据库’’中全文发布，并可按“章程"中规定享受相关权益。匾童途塞握童后进唇：旦圭生i旦二生；旦三生筮查。论文作者签名：刀赫日期：秽『D年占月8日曰Q∥，，1】J≈月幺，护：一材殍世肋r名7签艮稚期dyTl剥日摘要番木瓜(CaricaPapaya)，又名石瓜、万寿果、木瓜、乳瓜，原产于热带美洲及非洲，后来引种到我国。木瓜蛋白酶(Papain)是一类巯基蛋白酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，未成熟果实的乳汁中含量最丰富。木

5、瓜蛋白酶具有较强的蛋白水解和合成能力，还具有凝乳、解脂和溶菌活力，不仅可以用来改善植物蛋白的营养价值或功能性质，而且广泛应用于食品行业。本文将通过三种提取方法的比较研究，确定各提取工艺的最佳参数以期获得具有理想酶活的木瓜蛋白粗酶，并研究亲和双水相法较传统工艺提取木瓜蛋白酶的优劣性。本课题首先探索了乙醇法提取番木瓜中木瓜蛋白酶的最适提取条件，实验结果表明，在此提取工艺中，当L．cys和EDTA添加量分别为O．04mol／L和0．002mol／L时，其对木瓜蛋白酶活性起到最佳保护作用，乙醇添浓度为65％，体系pH6．0时能使酶活性达到8．372万单位／

6、mg。本课题还研究了用超滤法提取番木瓜中木瓜蛋白酶的最适提取条件，实验结果表明，在此提取工艺中，L．cys和EDTA添加量分别为O．04mol／L和0．002mol／L时对木瓜蛋白酶活性能起到最佳保护作用，操作压力、温度及时间分别为0．175MPa、60℃及5rain时能使酶活性达到9．398万单位／mg。此外，本课题还系统的研究了亲和双水相法提取番木瓜中木瓜粗蛋白酶的最适提取条件，结果表明，不同分子量的聚乙二醇(PEG)在双水相成相浓度范围内对木瓜蛋白酶活性影响不大；当相对PEG分子量为600，磷酸盐浓度为16％，体系pH6．0时能使酶活性达到1

7、0．376万单位／mg的最佳活性。同时，通过实验也考察了外加盐NaCl、KBr和CaCl2对双水相形成区域的影响，在选定的实验条件下，进一步优化了双水相体系以期获得较高酶活性回收率，结果表明，当PEG平均分子量为600，浓度20％，磷酸盐浓度16％，pH6．0时，在室温条件下，木瓜蛋白酶分配系数达到3．26，酶活性回收率可高达92．4％。通过研究比较了三种提取工艺的同时也验证试验了反应时间与温度在酶活性测定过程中对木瓜蛋白酶活性的影响，结果表明：木瓜蛋白酶在在30--90℃之间均有一定活力，且在80℃时木瓜蛋白酶活性达到最高，说明该酶对温度不敏感且

8、具有耐高温的特性。40℃条件下，20rain为最适反应时间。本课题首次将传统工艺与双水相萃取法提取木瓜粗蛋白酶工艺的条件进