螺蛳多糖的提取、分离、结构和活性研究

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1、]浙江工商大学硕士学位论文：YI721111111111II1111121111111112I{I螺蛳多糖的提取、分离、结构和活性研究摘要螺蛳(Bellamyapurificata)属于软体动物门(Mollusca)、腹足纲(Gastropoda)、前鳃亚纲(Prosobranchia)、田螺科(Vivipariidae)，是一种体外裹着一层锥形或纺锤形硬壳的软体动物，它广泛分布于我国长江流域及广东等地。现有的糖生物学研究表明，贝类多糖具有抗肿瘤、调节免疫、抗病毒等多种功效，且毒副作用较小，受到广大专家学者的关注。本文从螺蛳腹足肌中提取分离多糖，并对纯化所得

2、的单一多糖组分的结构和活性进行了研究，为螺蛳多糖的利用与开发提供参考。通过单因素试验和响应面分析法对螺蛳多糖的提取条件进行了优化，得到最佳提取工艺如下：料液比1：28(w／v)，提取温度75"C．，浸提时间5．2h。经苯酚．硫酸法测定最佳提取条件下的多糖得率为2．52％，该条件下所得多糖提取液冷冻干燥后得多糖粗品命名为CBPS。在分离纯化研究中，比较7"--氯乙酸法、Sevag法、木瓜蛋白酶一Sevag法和胰蛋白酶一Sevag法等脱蛋白工艺的优劣，综合考虑蛋白质的去除率、多糖的损失率、试剂的消耗等因素，选择了先以胰蛋白酶酶解，然后以Sevag试剂反复脱蛋白4

3、次的工艺流程。在此基础上进浙江工商大学硕士学位论文一步研究了透析、DEAE．sephacel离子交换柱层析和Sepharose6B凝胶柱层析等纯化手段在分离纯化CBPS中的应用，最终确定将CBPS溶液用截留分子量为14kDa的透析袋对水透析，而后用DEAE．sephacel离子交换柱(1．6x40cm)和Sepharose6B凝胶柱(1．6x120cm)进一步纯化，分级得到两个多糖组分，分别命名为BPS．1和BPS．2。经高效液相凝胶色谱和醋酸纤维素电泳分析表明BPS．1和BPS．2为单一组分。通过化学法对BPS．1和BPS。2的组成进行分析，结果表明BPS

4、．1和BPS．2的总糖含量(以无水葡萄糖计)分别为99．14％和97．06％，其中葡萄糖醛酸含量分别为18．58％和17．87％，氨基葡萄糖含量分别为12．91％和18．98％，并且还含有少量的硫酸基，分别为2．13％和2．47％。完全酸水解。气相色谱分析表明BPS．1是以葡萄糖为主，微量的海藻糖、阿拉伯糖、木糖组成，其摩尔百分比为96．14％：1．71％：O．97％：1．18％；BPS．2是以葡萄糖为主，微量的海藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖组成，其摩尔百分比为94．71％：1．98％：1．43％：0．58％：O．44％：0．86％。凝胶渗透色谱法测

5、得BPS．1和BPS．2的分子量分别为7．2x1CDa和8．3x106Da。红外光谱分析表明，组成BPS．1和BPS．2的单糖为吡喃糖，且以a．糖苷键连接。部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化．气质分析、以及1HNMR、13CNMR分析表明，BPS．1的基本骨架由a．(1—4)糖苷键连接的葡萄糖构成，侧链为0【．(1—3)糖苷键连接的葡萄糖和非还原末端残基，它们均通过甜(1—6)糖苷键与主链葡萄糖相连；BPS．2的基本骨架由a．(1—4)糖苷键连接的葡萄糖构成，两条支11浙江工商大学硕士学位论文链则由a．(1-÷3)糖苷键连接的葡萄糖和非还原末端残

6、基构成，它们分别通过o【．(1—3)和0【．(1_6)糖苷键与主链葡萄糖相连。BPS．1的基本结构为：-删c·-D．-GIc-(I3)．--D-GIcl6—4)．t．D吒似l一4)．{【^-D-Gk-．(1-'-4)k^-D岖州l一4)，3．【▲删“l一4)】r^．DK；l“l一4)-l-D-GIe．(I-,-BPS．2的基本结构为：--D-．Glel6—4)-·-D．．61c-(1一分{【·-D．431c-(1—4)】r--D-Gk-O--4)}11．【·-D-Cdc-(14)k-D-,GIc．-(I--4)---D-Glc,-(I'-．"3l▲-I)—G

7、lc-(1--'-3)-【‘DJGlc-(1。·3)】r·-D．．Cde通过鼠耳肿胀法抗炎实验表明BPS．1和BPS．2均具有抗炎活性，且在一定浓度范围内，与浓度呈正相关。在浓度范围0．05"--'1．0mg／ml内，BPS．1和BPS．2对鼠耳肿胀程度的抑制率分别在14．02""57．56％和11．07"-'56．46％之间，两者抗炎效果基本相同；纸片扩散法抑菌实验分析表明BPS．1和BPS．2仅对革兰氏阴性茵具有抑菌活性，且BPS．1的抑菌能力略高于BPS．2；体外抗氧化DPPH·清除实验表明BPS．1和BPS．2不具有显著的DPPH·清除能力；MTT法

8、体外抗肿瘤活性测定表明，BPS．1和BPS．2体外抑