联合应用SSH和cDNA表达谱芯片筛选肝星状细胞早期活化的相关基因.doc

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1、联合应用SSH和cDNA表达谱芯片筛选肝星状细胞早期活化的相关基因作者：何天霖吴志勇罗蒙邱江锋　【摘要】目的利用抑制消减杂交(suppressionsubtractivehybridization，SSH)和cDNA表达谱芯片筛选早期活化的肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)和大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化组织、重度肝纤维化组织中差异表达的基因。方法从SSH构建的大鼠轻度肝纤维化、重度肝纤维化2个差异cDNA文库中挑选1000条上调显著的基因，与正常大鼠4136条基因克隆制作成一张芯片，筛选早期活化的肝星状细胞相关基因。结果获得与HSC早期活化相关的上

2、调基因有202条，下调基因有80条，其中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(serumandglucocorticoidsensitivekinase,SGK)在正常大鼠基因克隆和2周及8周SSH上调差异基因中均呈上调信号。结论联合应用SSH和cDNA表达谱芯片是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速、经济和有效的方法；SGK可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点，参与了肝星状细胞的早期活化和信号传导。【关键词】肝星状细胞抑制消减杂交cDNA表达谱芯片肝纤维化血清和糖皮质激素调节蛋白激酶Identificationofinitiativeactivati

3、onrelatedgenesofhepaticstellatecellbycombiningSSHandcDNAmicroarray【Abstract】ObjectiveToidentifyinitiativeactivatedgenesofhepaticstellatecellinnormalhepatictissues,slightliverfibrosistissuesandsevereliverfibrosistissuesbyusingsuppressionsubtractivehybridization(SSH)andcDNAmicroarray.MethodsI

4、nitiativeactivatedgenesofhepaticstellatecellwasidentifiedbyselecting1000geneswithobviousupregulationfromtwocDNAlibrariesofslightliverfibrosisandsevereliverfibrosistoclonewith4136genesfromnormalratsformakingachip.ResultsWeobtained202cDNAswithupregulatedexpressionand80cDNAswithdownregulate

5、dexpression.Theglucocorticoidsensitivekinase(SGK)geneshowedtobeupregulatedamongnormalhepatictissues,slightliverfibrosistissuesandseriousliverfibrosistissues.ConclusionsThecombinationofSSHandcDNAmicroarrayisarapidandeffectivemethodtoscreenandidentifydifferentiallyexpressedgenesindifferentsa

6、mples.Asafunctionalconvergesiteforsignaltransductionpathwayofmanycellsandcascadereactionofcellphosphorylation,SGKgeneplaysakeyroleininitiativeactivationandsignaltransductionofhepaticstellate7cells.【Keywords】Hepaticstellatecells;Suppressionsubtractivehybridization;cDNAmicroarray;Liverfibrosi

7、s;Serumandglucocorticoidsensitivekinase肝炎后肝硬化所致的门静脉高压症是我国的常见疾病，而肝纤维化是其发展过程中最主要的环节。大量的研究表明，肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)激活并转化为肌成纤维样细胞是肝纤维化发生中的核心环节。迄今为止，国内外鲜见有关HSC在其早期激活阶段的基因差异表达研究。因此，本研究在肝纤维化形成和逆转的不同时期及在应用血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)刺激因子作用