应用基因表达谱芯片筛选高能x射线诱导hfl1细胞胶原

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1、中华放射肿瘤学杂志２０１７年３月第２６卷第３期ＣｈｉｎＪＲａｄｉａｔＯｎｃｏｌ，Ｍａｒｃｈ２０１７，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．３·３２９··物理·生物·技术·应用基因表达谱芯片筛选高能Ｘ射线诱导ＨＦＬ⁃１细胞胶原相关基因钱霞李小彦肖明兵江枫顾红梅周士忠袁菊萍陈不尤２２６００１南通大学附属医院放疗科［陈不尤、顾红梅、周士忠、袁菊萍、钱霞（现单位：南通市肿瘤医院放疗科）］，消化病研究室（李小彦、肖明兵、江枫）通信作者：陈不尤，Ｅｍａｉｌ：１５１５１３６５２９０＠１６３．ｃｏｍＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００

2、４⁃４２２１．２０１７．０３．０１７【摘要】目的探讨高能Ｘ射线对人胚肺成纤维细胞（ＨＦＬ⁃１）细胞胶原表达产生影响，并筛选胶原相关基因，为临床放射性肺纤维化的治疗提供理论依据。方法将体外培养的ＨＦＬ⁃１细胞随机分为对照组和放射组，放射组细胞予６ＭＶＸ射线５Ｇｙ单次照射。照射后２４ｈ以消化法检测两组细胞羟脯氨酸（ＨＹＰ）表达情况，ＲＴ⁃ＰＣＲ及蛋白印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达情况，采用基因芯片技术分析基因表达谱改变情况。结果照射后２４ｈ放射组细胞ＨＹＰ表达显著高于对照组（１?８３４μｇ／ｍｌ∶４?９１２μｇ／ｍ

3、ｌ，Ｐ＝０?０００）。放射组照射后２４ｈⅠ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达均明显高于对照组（１８?５３５∶１８６?７７９，Ｐ＝０?０００；４?３３７∶２４?４２５，Ｐ＝０?０００）。两组细胞差异表达的基因为１８７９个，其中放射组上调基因７７１个、下调基因为１１０８个。参与纤维化的基因上调５倍以上的有ＴＧＦ⁃β、ＴＧＦ⁃β、ＭＭＰ２８、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２７和ＳＭＡＤ６。结论高能Ｘ射线能诱导ＨＦＬ⁃１细胞产生胶１３原，表达谱基因芯片技术可有效筛选高能Ｘ射线诱导胶原相关基因。放射性肺纤维化的发生发展由多个类型基因参与调控。【关键

4、词】基因芯片；人胚肺成纤维细胞；胶原基因基金项目：南通市社会事业科技创新与示范（ＨＳ２０１３０４３）ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｃｈｉｐｉｎｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｃｏｌｌａｇｅｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙＸ⁃ｒａｙｉｎＨＦＬ⁃１ｃｅｌｌｓＱｉａｎＸｉａ，ＬｉＸｉａｏｙａｎ，ＸｉａｏＭｉｎｇｂｉｎｇ，ＪｉａｎｇＦｅｎｇ，ＧｕＨｏｎｇｍｅｉ，ＺｈｏｕＳｈｉｚｈｏｎｇ，ＹｕａｎＪｕｐｉｎｇ，ＣｈｅｎＢｕｙｏｕＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＯｎｃｏｌｏｇｙ（ＣｈｅｎＢ

5、Ｙ，ＧｕＨＭ，ＺｈｏｕＳＺ，ＹｕａｎＪＰ，ＱａｉｎＸ），ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（ＬｉＸＹ，ＸｉａｏＭＢ，ＪｉａｎｇＦ），ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮａｎｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ２２６００１，Ｃｈｉｎａ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｉｇｈ⁃ｅｎｅｒｇｙＸ⁃ｒａｙｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｏｎｃｏｌｌａｇｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｆｅｔａｌｌｕｎｇｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＨＦＬ⁃１）ａｎ

6、ｄｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｃｏｌｌａｇｅｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙＸ⁃ｒａｙ，ａｎｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒａｄｉａｔｉｏｎ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＨＦＬ⁃１ｃｅｌｌｓｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗａｓｉｒｒａ

7、ｄｉａｔｅｄｗｉｔｈ６ＭＶＸ⁃ｒａｙａｔａｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｏｆ５Ｇｙ．Ａｔ２４ｈｏｕｒｓａｆｔｅｒｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ（ＨＹＰ）ｉｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｔｙｐｅｓⅠａｎｄⅢａｔｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＲＴ⁃ＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ａｎｄｇｅｎｅｃｈｉｐｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆ

8、ｙｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｔ２４ｈｏｕｒｓａｆｔｅｒｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｈａｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＹＰｔｈａｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（１?８３４μｇ／ｍｌｖｓ