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《应用基因表达谱芯片技术筛选hcv+p7蛋白反式调节基因》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、《中国肝脏病杂志（电子版）》2010年第2卷第1期●论著●5应用基因表达谱芯片技术筛选HCVp7蛋白反式调节基因122212郭江，成军，洪源，王琦，邢卉春，毛羽（1.首都医科大学北京地坛医院内五科，北京100015；2.首都医科大学北京地坛医院传染病研究所，北京100015）摘要:目的应用基因芯片技术对pcDNA3.1（－）和pcDNA3.1（－）-p7分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析，筛选能被HCVp7蛋白反式调节的靶基因，研究p7蛋白的生物学功能。方法以含有HCV全基因组的pBRTM质粒作为模
2、板，应用聚合酶链反应（PCR）扩增p7蛋白编码基因片段，以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1（－）-p7。以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2，提取总mRNA，逆转录为cDNA，与转染空白表达载体pcDNA3.1（－）的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较。结果构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定，证实准确无误，提取高质量的总mRNA并逆转录成cDNA，进行DNA芯片技术分析。在1152个基因表达谱的筛选中，有1个基因表达水平显著上调，22个基因表达水平显著下调。结论HCV
3、p7蛋白是一种反式调节因子，p7基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。关键词：丙型肝炎病毒；p7蛋白；反式调节Screeningandidentificationofgenestrans-regulatedbyHCVp7proteinwithmicroarrayassay122222GUOJiang,CHENGJun,HONGYuan,WANGQi,XINGHui-chun,MAOYu(1.TheFifthDepartmentofInternalMedicine,BeijingDitanHospital,
4、CapitalMedicalUniversity,Beijing100015,China;2.InstituteofInfectiousDiseases,BeijingDitanHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100015,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatethebiologicalfunctionsofhepatitisCvirusp7proteinandscreengenesregulatedbyp7proteinb
5、ycDNAmicroarraytechnique.MethodsTheHCVp7codingDNAfragmentwasamplifiedwithpolymerasechainreaction(PCR)withpBRTMplasmidcontainingthefulllengthofHCVgenomeasthetemplate.TheexpressionvectorofpcDNA3.1-p7wasconstructedbyroutinemolecularbiologicalmethods.TheHepG2ce
6、llsweretransfectedbypcDNA3.1(-)andpcDNA3.1(-)-p7,respectively,usingFuGENE6transfectionreagent.TotalRNAwasisolatedandreversetranscribed.ThecDNAweresubjectedformicroarrayscreeningwith1152cDNAprobes.ResultsTheexpressionvectorwereconstructedandconfirmedbyrestri
7、ctionenzymedigestionandDNAsequencinganalysis.HighqualitymRNAandcDNAwerepreparedandsuccessfulmicroarrayscreeningwasconducted.Fromthescanningresults,onegenewasup-regulatedand22genesweredown-regulatedbyHCVp7protein.ConclusionsHCVp7proteinisatrans-regulator.The
8、expressionofp7proteinaffecttheexpressionspectrumofHCVinfectedhepatocytes.Keywords:HepatitisCvirus;p7protein;Trans-regulation丙型肝炎病毒（HCV）是世界范围内慢性肝基因组含有一个长的开放阅读框架（ORF），炎的主要病原之一，约有1.7亿人被感染，常导致编码一个约由3010个氨基
