应用基因表达谱芯片筛选高能x射线诱导hfl1细胞胶原

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1、中华放射肿瘤学杂志2017年3月第26卷第3期ChinJRadiatOncol,March2017,Vol.26,No.3·329··物理·生物·技术·应用基因表达谱芯片筛选高能X射线诱导HFL⁃1细胞胶原相关基因钱霞李小彦肖明兵江枫顾红梅周士忠袁菊萍陈不尤226001南通大学附属医院放疗科[陈不尤、顾红梅、周士忠、袁菊萍、钱霞(现单位:南通市肿瘤医院放疗科)],消化病研究室(李小彦、肖明兵、江枫)通信作者:陈不尤,Email:15151365290@163.comDOI:10.3760/cma.j

2、.issn.1004⁃4221.2017.03.017【摘要】目的探讨高能X射线对人胚肺成纤维细胞(HFL⁃1)细胞胶原表达产生影响,并筛选胶原相关基因,为临床放射性肺纤维化的治疗提供理论依据。方法将体外培养的HFL⁃1细胞随机分为对照组和放射组,放射组细胞予6MVX射线5Gy单次照射。照射后24h以消化法检测两组细胞羟脯氨酸(HYP)表达情况,RT⁃PCR及蛋白印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达情况,采用基因芯片技术分析基因表达谱改变情况。结果照射后24h放射组细胞HYP表达显著高于对照组(1?

3、834μg/ml∶4?912μg/ml,P=0?000)。放射组照射后24hⅠ、Ⅲ型胶原基因及蛋白表达均明显高于对照组(18?535∶186?779,P=0?000;4?337∶24?425,P=0?000)。两组细胞差异表达的基因为1879个,其中放射组上调基因771个、下调基因为1108个。参与纤维化的基因上调5倍以上的有TGF⁃β、TGF⁃β、MMP28、MMP26、MMP27和SMAD6。结论高能X射线能诱导HFL⁃1细胞产生胶13原,表达谱基因芯片技术可有效筛选高能X射线诱导胶原相关基因。

4、放射性肺纤维化的发生发展由多个类型基因参与调控。【关键词】基因芯片;人胚肺成纤维细胞;胶原基因基金项目:南通市社会事业科技创新与示范(HS2013043)ApplicationofgenechipinidentifyinggenesrelatedtocollagenproductioninducedbyX⁃rayinHFL⁃1cellsQianXia,LiXiaoyan,XiaoMingbing,JiangFeng,GuHongmei,ZhouShizhong,YuanJuping,ChenBuyo

5、uDepartmentofRadiationOncology(ChenBY,GuHM,ZhouSZ,YuanJP,QainX),DepartmentofGastroenterology(LiXY,XiaoMB,JiangF),AffiliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong226001,China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofhigh⁃energyX⁃rayirradiationoncollagene

6、xpressioninhumanfetallungfibroblasts(HFL⁃1)andidentifythegenesrelatedtocollagenproductioninducedbyX⁃ray,andtoprovideatheoreticalbasisfortheclinicaltreatmentofradiation⁃inducedpulmonaryfibrosis.MethodsHFL⁃1cellsculturedinvitrowererandomlydividedintocont

7、rolgroupandirradiationgroup.Theirradiationgroupwasirradiatedwith6MVX⁃rayatasingledoseof5Gy.At24hoursafterirradiation,theexpressionofhydroxyproline(HYP)inthetwogroupswasdeterminedbythedigestionmethod.TheexpressionofcollagentypesⅠandⅢatmRNAandproteinleve

8、lswasmeasuredbyRT⁃PCRandWesternblot.Andgenechipwasusedtoidentifythedifferentiallyexpressedgenesbetweenthetwogroups.ResultsAt24hoursafterirradiation,theirradiationgrouphadsignificantlyhigherexpressionofHYPthanthecontrolgroup(1?834μg/mlvs

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