幽门螺杆菌cagpai hp0523基因的克隆及功能预测

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1、幽门螺杆菌CagPAIhp0523基因的克隆及功能预测作者：邵世和钟桥黄世腾韩军黄河田树伟【摘要】目的：明确幽门螺杆菌CagPAIhp0523基因的功能，探讨其在幽门螺杆菌致病中的作用。方法：设计引物，以幽门螺杆菌NCTC11637为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增获得目的片段；将其进行TA克隆后，进行测序。将该基因序列与其他菌株做BLAST比对分析，并结合生物信息学数据库和软件，分析其序列特征和理化特性。结果：经酶切，测序分析表明，插入的基因片断为510bp，与基因库公布的幽门螺杆菌26695及J99序列相

2、比较，同源性高达94%；软件预测其编码的蛋白为169个氨基酸，其相对分子质量约为19.7kDa，等电点约为9.53；基序分析表明，在33～165位氨基酸之间存在一个保守的SLT催化基序，可能是溶菌糖基转移酶；对其催化能力进行预测，结果表明，HP0523（33.7%）催化能力可能较T4溶菌酶（32.3%）和溶菌酶SLT70（28.6%）的活性高。结论：成功克隆了幽门螺杆菌CagPAI的hp0523基因，对其序列进行了深入分析，为进一步研究其功能，阐明幽门螺杆菌CagPAI的致病机制奠定了基础。【关键词】幽门螺杆菌；C

3、ag致病岛；功能预测；溶菌糖基转移酶11［Abstract］Objective:Toanalyzethefunctionandtheroleofhp0523geneinHelicobacterpylori(H.pylori)CagPAIforpathogenicity;Methods：Polymerasechainreaction(PCR)wasusedtoamplifythehp0523genefromH.pyloriNCTC11637,andthenclonedintothepGEMTeasyplasmida

4、ndsequenced.Usethebioinformationdatabasesandtoolstoanalyzetheinformationandpropertiesofthetargetsequence.Results：Sequenceanalysissuggeststhatthisfragmentwith510bpandencoded169aawhichexperiencesarelativemolecularweightat19.7kDaandisoionicpointwasat9.53.Theidenti

5、tyofthisgenewas94%approximatelyinH.pyloristrains26695andJ99.Motifanalysissuggeststhatitmaybelytictransglycosylase,whichharboredaconservedcatalysisdomainbetween33to165sitesinthetargetsequence.FromthegeneralacidbasecatalysispotentialsuggestthatHP0523(33.7%)withah

6、ighercatalysisactivitythanT4lysozyme(32.3%)andSLT70(28.6%).Conclusion：Thehp0523genewasclonedfromH.pyloriNCTC11637successfully,andprovideasolidbasefortheresearchonthepathogenicitymechanismofH.pyloriCagPAI.［Keywords］Helicobacterpylori；Cagpahogenicityisland；functi

7、onalprediction；lytictransglycosylase11幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,H.pylori）是重要的胃肠道致病菌，其感染在世界范围内流行，全球感染率达50％以上，其中包括我国在内的发展中国家感染率高达80％以上，已成为危害我国公共卫生安全的重大问题［1］。流行病学研究表明，CagA和VacA是以中国为代表的东方菌株中的主要毒力因子［2］。编码CagA的Cag致病岛（CagPAI）是由约27个编码基因组成，大小约为40kb。目前针对CagPAI的研究，主要集中在Ca

8、gA毒性机制，特别是其转运后诱导的一系列细胞损伤及其信号传导的变化［3］。然而对于负责其转运的转运装置研究较少。其中，hp0523基因被认为可能参与CagA蛋白的转运，但其具体功能尚不清楚。鉴此，本研究采用基因工程的方法，克隆获得了CagPAI编码的hp0523基因；并利用生物信息学技术，对其序列特征进行深入分析，旨在进一步研究