幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析

幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析

ID:44372514

大小:127.21 KB

页数:3页

时间:2019-10-21

幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析_第1页
幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析_第2页
幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析_第3页
资源描述:

《幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库

1、【论著】幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析夏晓燕1,段广才2、',代丽萍J范清堂'[摘要1目的:将幽门螺杆菌(Helicobacter、哄H,Hp)粮毛蛋白B亚单位基因(/ZoB)克隆到质粒载体PNEB193上,并进行序列分析,为Hp疫苗的构建奠定基础。方法:用PCR方法扩增Hp/ZaB基因,并将其定向克隆入质粒pNEB193±,然后进行序列分析。结果:PCR扩增获得长度为1545bp的肿基因片段,并成功克隆入pNEB193,序列分析结果显示扩增的JTaB基因序列与Genebank公布的JlaB基因序列基本一致。结论:本研究获得了flaB阳性克隆子,为Hp重组疫苗的

2、研究莫定了基础。[关键词]幽门螺杆菌;flaB;基因克隆;测序[中图分类号]R183[文献标识码]A[文章编号]1003-8507(2005)12-1592-03CLONEANDSEQUENCEANAI.YSISOFHELICOBACTERPYIjORIFLAGELLARPROTEINBGENE.XIAXiao-yan,DU-ANGuan-cai,FANQing-tang,etal.DepartmentofPublicHealthfHenanUniversityofSlierixafidTechnology,Luoyangf471009Abstract;Objecti

3、ve:TocloneHelicobacterpylori(H.pylori)flaRintoplasmidandanalyzegenesequence,andtolayfoundationforHpvaccine.Methods:H.pyloriflaBgenewasamplifiedbyPCRandwasinsertedintoplasmidpNEB193directionally.ThesequenceofflaBwasanalyzed.Results:A1545basepairslongflaBgenewasobtainedusingPCRmethodandw

4、asclonedintoplasmidpNEB193successfully.ThesequenceanalysisforflaBshowedthattheflaBgenewasidenticalwithGenebank's.Conclusion:ItisindicatedthatwehaveobtainedthecorrectflaBgenewhichwilllayfoundationforH・pylorirecombinantvaccine・Keywords:Helicobacterpylori;flaB;geneclone;sequence幽门螺杆菌(Hdic

5、obacterpylori.简称Hp)感染在世界范围内广泛流行。已证实Hp感染是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病因,与胃癌和胃MALT淋巴瘤的发病也有密切关系⑴2】。目前,主要应用抗生素和质子泵抑制剂来治疗Hp,但广泛应用抗生素会导致耐药菌的不断增多⑶,复发的机会也较大。因此,根除Hp感染只有依靠疫苗的成功研制。鞭毛蛋白(FlaB)是Hp的蛋白质和免疫原之一,具有免疫原性且位于细菌表面,相对保守,有望成为Hp亚单位疫苗的重要候选组分之一⑷。本研究对Hp/ZoB基因进行了成功克隆。1材料与方法1.1质粒与菌株质粒PNEB193购自NEB公司。Hp菌株MEL-Hp27系本实验

6、室分离培养。大肠杆菌TB1系本研究室保存。1.2试剂试剂Sall、PsiI、PyrobestDNA聚合蘭、[资助项目]本课题系河南竹医学科技创新人才工程基金资助项目2000-84[作者单位]1•河南科技大学预防医学教研室,祜阳,471003;2.郑州大学公共卫生学院流行病学教研室;3•河南省分子医学亜点学科开放实脸室(作者简介]夏晓燕(1975~),女,讲师,主买工作方向:分子诡行病学。(通讯作者]段广才,E-mail:gcduan©public2.zz.ha.cnTqDNA连接爾购自大连宝信生物工程公司,DNA标准分子质量XDNA/E8RI+HindDImarke

7、r购自上海生工公司。其他常规试剂按《分子克隆实验指南》要求配制。1.3Hp培养与Hp基因组DNA的制备1.3.1Hp培养Hp用含8%羊血的布氏琼脂培养基,3兀厌氧环境培养。1.3.2Hp基因组DNA的制备DNA用常规酚、氯仿抽提法获得。1.4引物合成根据NCTC11637flaB序列设计引物。在上游引物,引物由上海生工公司合成。5'端加PstI酶切位点,保留起始密码子ATG;在下游引物5'端加EooRlK切位点,保留终止密码子TAA。引物序列如下:UpperGGGCTGCAGATGAGTTTTAGGATAAA(26bp)PstIlower(XGAAT

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。