幽门螺杆菌 γ谷氨酰转肽酶基因的克隆及序列分析

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1、幽门螺杆菌γ谷氨酰转肽酶基因的克隆及序列分析作者：唐炜，张尤历，王文兵，陈慧娟【摘要】目的：克隆不同疾病来源的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)γ谷氨酰转肽酶（Gammaglutamyltranspeptidase，GGT）基因，并进行序列分析。方法：从人胃黏膜组织中分离培养获得Hp，提取其基因组DNA，对GGT基因进行PCR扩增，克隆进pMD18T载体，进行测序和生物信息学分析，并与基因库中公布的标准株26695和J99的GGT氨基酸序列进行比对分析。结果：成功克隆了分别来源于慢性胃炎，胃溃疡，十二指肠溃疡和胃癌的4种Hp菌株GGT片段，并进行了序列分析。4

2、种病源的HpGGT序列大小均为1704bp，编码567个氨基酸，理论分子质量是61kDa，等电点是9.3，在N端具有信号肽，含有ATP蛋白激酶结合结构域和γ谷氨酰转肽酶保守结构域。序列比对分析显示，不同来源的Hp菌株GGT具有很高的保守性。结论：GGT在Hp中高度保守，具有分泌作用，可能对宿主细胞产生影响。该基因的成功克隆为进一步研究其功能打下了基础。【关键词】幽门螺杆菌；γ谷氨酰转肽酶；基因克隆；序列分析；信号肽［Abstract］Objective:Tocloneandanalyzetheγ11glutamyltranspeptidase(GGT)geneofHelicobact

3、erpylori(H.pylori).Methods：ThestrainsofH.pyloriwereisolatedfromhumangastricmucosawiththediseasesofchronicgastritis,gastriculcer,duodenalulcerandgastriccancer;andculturedonsolidagarmedium.TheGGTamplifiedbyPCRfromH.pyloriDNAwasclonedintoTvector.Thegenewassequencedandanalyzedbythebioinformaticsmethod

4、.ThesequenceswerecomparedwiththetypicH.pyloristrains26695andJ99.Results：TheGGTgenewassuccessfullyclonedintopMD18Tvector.TheGGTcontains1704bpandencodes567aminoacidswithapredictedof61kDa,PIwas9.3.ThegenehadasignalpeptideintheNterminalandtherewerebothproteinkinasesATPbindingregionsignatureandtheγ

5、glutamyltranspeptidasesignature.ThesequenceanalysisshowedthattheaminoacidsequenceswerehighlyconservedindifferentH.pyloristrains.Conclusion：GGTofH.pyloriisaconservedaminoacidandhasanimportantroleinhostcells.Cloningthisgenewillbehelpfulinitsfunctionalstudy.［Keywords］Helicobacterpylori;γglutamyltran

6、speptidase;genecloning；sequenceanalysis;signalpeptide11自从1983年Warren和Mashall由人胃黏膜分离出幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,Hp）后，Hp感染与慢性胃炎（chronicgastritis,CG）、胃溃疡（gastriculcer,GU）、十二指肠溃疡（duodenalulcer,DU）和胃癌（gastriccancer,GC）等疾病的关系逐步被人们所认识［1］。国际癌症机构已将Hp列为Ⅰ级致癌因子［2］。γ谷氨酰转肽酶(Gammaglutamyltranspeptidase，GGT)是一种催化

7、肽基转移作用的酶，广泛存在于原核和真核细胞中［3］，在动物体内主要存在于肾、肝、胰等脏器，在谷胱苷肽的新陈代谢中起到了重要的作用［4］。Hp分泌的GGT通过抑制CD4+T细胞的增殖，从而抑制了CD4+T细胞对Hp的清除作用，可见GGT对Hp的定植有一定的作用［5］。GGT参与诱导Hp介导的程序性细胞死亡，可能是一个较好的抗肿瘤因子［6］。但程序性细胞死亡的持续发生，破坏了新细胞生成和细胞消亡之间的平衡从而产生病理作用［7