吡格列酮对糖尿病大鼠肺组织tnfα和nfκb的影响

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1、吡格列酮对糖尿病大鼠肺组织TNFα和NFκB的影响【摘要】目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ激动剂吡格列酮对糖尿病大鼠肺部损害的保护作用及其机制。方法腹腔注射链脲佐菌素(55mg/kg)制成糖尿病动物模型。48只健康SD雄性大鼠随机分为4组：对照组、糖尿病组、高、低剂量吡格列酮治疗组。8w后检测存活大鼠肺组织肿瘤坏死因子（TNF）α水平，取右肺组织，观察病理改变，并检测核因子（NF）κB活性表达的变化。结果糖尿病组大鼠肺组织TNFα的水平和NFκB活性较对照组显著增高(P＜

2、0.05)。给予吡格列酮处理8w后，肺组织TNFα的水平和NFκB活性明显降低(P＜0.05)。结论PPARγ激动剂吡格列酮可有效减轻糖尿病大鼠肺部损害，其机制可能与抑制NFκB过度活化和TNFα的水平有关。【关键词】吡格列酮；糖尿病；核转录因子糖尿病(DM)是下呼吸道感染以及感染严重程度的独立危险因素〔1〕，肺组织是DM损害的重要靶器官〔2〕。组织蛋白的非酶糖基化(nonenzymaticglycation，NEG)和氧化应激可产生大量诸如肿瘤坏死因子（TNF）α、白介素（IL）6、

3、IL12等促炎细胞因子和促炎症介质，导致肺组织和全身器官损害，其中核因子κB(NFκ8B)的过度活化是炎症反应扩大的关键环节。许多研究表明过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂具有抗炎作用，其机制与干扰转录水平NFκB的激活而抑制单核细胞及巨噬细胞表达IL6、IL12及TNFα生成有关。因此，本课题拟通过建立DM大鼠模型，研究PPARγ激动剂吡格列酮对DM大鼠肺组织NFκB活性和TNFα水平的影响，进一步探讨DM易合并肺部感染的发病机制。　　1材料与方法　　1.1动物分组

4、健康SD雄性大鼠48只(江苏大学医学院动物实验室提供)，体重(180±24)g，随即分为4组，每组12只。A组：对照组；B组：DM组；C组：低剂量吡格列酮治疗组；D组：高剂量吡格列酮治疗组。　　1.2实验方法　　1.2.1DM大鼠模型制作DM模型大鼠按55mg/kg体重的链脲佐菌素(STZ，溶解于0.1mol/LpH4.2柠檬酸缓冲液)腹腔注射。以随机血糖＞16.7mmol/L，尿糖强阳性作为DM动物模型建立标准，未达到标准者均淘汰。　　1.2.2对照组处理对照组仅注射相同体积的柠檬酸缓冲液。8　　1

5、.2.3吡格列酮治疗组模型成功后，吡格列酮治疗组分别予10、50mg/kg吡格列酮经食道灌胃注入。　　1.3检测指标　　1.3.1肺组织TNFα检测将存活的4组动物于第8周以1%戊巴比妥钠(30mg/kg体重)腹腔注射麻醉；将大鼠固定于手术台上，打开胸腔，取出一小块右侧肺组织剪成小块；滤纸吸干残血后，迅速称取400mg，加入1ml生理盐水；于冰浴中用超声波匀浆机匀浆，每次匀浆15s后，间歇20s待标本降温后再匀浆，反复以上操作3次；将制成的匀浆液用低温离心机在4℃，以3000r/min的速度离心15

6、min；取上清液用ELISA方法测定TNFα水平。　　1.3.2肺组织学检查取右肺组织常规作石蜡包埋切片，行HE染色，光镜观察。　　1.3.3肺组织NFκB活性表达检测兔抗鼠NFκBp65抗体∶蒸馏水按1∶50稀释，常规行免疫组化染色检测肺组织NFκ8B表达。阳性评分标准：镜下观察5个高倍镜视野染色结果，细胞核或(和)细胞浆含棕黄色颗粒为阳性；根据免疫组化着色强度评分(0分，无；1分，弱；2分，中；3分，强)和阳性细胞率评分(0分，＜5%；1分，5%～10%；2分，10%～20%；3分，20%

7、～50%；4分，＞50%)之和为该病例评分值。以试剂盒内的阳性切片作为阳性对照，以PBS液分别替代一抗、二抗及SA/HRP作为每次染色阴性对照。　　1.4统计学方法应用SPSS13.0统计软件，数据资料均以x±s表示，各组间比较采用单因素方差分析。　　2结果　　2.1肺组织TNFα检测结果DM组大鼠肺组织TNFα水平〔（4.64±0.35）ng/ml〕明显高于对照组〔（2.01±0.22）ng/ml〕(P＜0.05)，高、低剂量吡格列酮治疗组肺组织TNFα水平〔（2.70±0.42）,（2.8

8、5±0.31）ng/ml〕均较DM组显著下降(P＜0.05)，但高、低剂量吡格列酮治疗组间TNFα水平差异无显著性(P＞0.05)。　　2.2病理组织学改变DM大鼠肺组织与正常大鼠比较，其肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞基底膜明显增厚，肺泡间隔增宽，间质中胶原和弹性蛋白含量增多，部分肺泡腔萎缩甚至塌陷，部分肺泡腔内有多量炎性细胞浸润。吡格列酮治疗组病变程度减轻，见图1。　　2.3各组免疫组织化学检测结果对照组大鼠气道上皮、肺泡上皮、肺泡巨噬细胞可见NF