吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉nosno和adipor的影响

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1、摘要解系统活性、改善内皮细胞功能，降低C反应蛋白质水平。但其改善主动脉血管功能机制尚不明确。因此笔者采用高脂饮食建立高脂血症大鼠主动脉损伤模型，探讨吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉损伤进程的干预作用及机制，为吡格列酮抗动脉粥样硬化提供理论支持。目的：通过观察吡格列酮对高脂血症大鼠血浆脂联素(ADP)、主动脉一氧化氮(NO)、抑制型一氧化氮合酶(iNOS)、结构型一氧化氮合酶(cNOS)、总一氧化氮合酶(tNOS)的改变和脂联素受体(AdipoR)的表达改变及吡格列酮的干预影响，探讨吡格列酮可能的作用机制，为吡格列酮抗动脉粥样硬化提供理论依据。方法：前12周，27只雄性SD大鼠经随机数字表随机分为两

2、组，随机分为正常对照组9只、高脂饮食组18只，进行造模实验。12周后，存活的造模组17只大鼠按随机数字表随机分为模型组、吡格列酮组。对照组喂以标准大鼠饲料，造模组依据给予高脂饮食(胆固醇2％、胆酸盐0．5％、甲基硫氧嘧啶0．2％和72．3％基础饲料)喂养，喂养12周后，第12周末从眼眶后静脉抽血检测血脂水平以确定模型是否复制成功，并检测血糖(bloodglucose，BG)水平。随后将高脂饮食组大鼠随机分为模型组和吡格列酮组，吡格列酮组：吡格列酮10mg·k91·d-1连续灌胃，对照组和模型组：双蒸水灌胃，1．5ml／1009体重，1次／日；均灌胃4W。给药4周后，禁食24小时，于次日上午8时

3、，用20％氯胺酮，以lml／1009剂量麻醉后，剪开胸腹腔，暴露心脏，左心室穿刺取血5Inl，室温静置l小时后，3000转／分离心5分钟，分离血清置-20℃冰箱保存，待测血清指标；于冰盘中分离主动脉，并在主动脉弓与胸主动脉交界处取材，用10％中性甲醛固定作HE病理检测，剩余主动脉组织置液氮中保存待测其他指标。吡格列酮干预4周后，检测各组血脂水平，三酰甘油(TG)用TPO．PAP法检测，总胆固醇(TC)用CHOD．PAP法检测，低密度脂蛋白胆固醇(LDL．C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL．C)用选择性沉淀法检测，并检测BG。用伊红染色法、免疫组化染色显示血管内皮细胞后采用光镜观察、电镜观察内皮细

4、胞微观结构。酶n硕士学位论文联免疫法检测血清ADP、硝酸还原法测血清和主动脉NO、精氨酸催化法检测主动脉tNOS、iNOS及eNOS(等于tNOS与iNOS之差)的水平。蛋白免疫印迹杂交法测主动脉脂联素受体l和2蛋白水平、实时荧光定量PCR法测主动脉脂联素受体l和2基因表达。光镜和电镜观察主动脉形态学改变。主动脉NOS-NO，脂联素及其受体下降可能介入高脂血症血管损伤，吡格列酮具有抗动脉粥样硬化作用，该作用可能与提高血清ADP和主动脉血管AdipoR表达有关。统计方法：统计软件使用SPSSl3．0进行分析，定量数据以均数4-标准差(i±J)表示；两组资料比较若方差齐，用独立样本的t检验，若方差

5、不齐，用Welch校正t检验；多组问比较用完全随机化设计资料的方差分析，若方差齐，则采用LSD检验进行两两比较，若方差不齐用Dunnett’sT3检验。咫0．05认为有统计学意义。结果：1．大鼠血脂、血糖变化吡格列酮干预前，造模后第12周高脂饮食组TG、TC、LDL．C较对照组明显升高俨

6、、吡格列酮组间HDL．C、LDL．C、BG差异无统计学意义(P=0．884，P=0．177,P=0．860),但吡格列酮组HDL．C有升高趋势。2．大鼠主动脉形态学改变2．1主动脉病理HE染色形态改变对照组主动脉内皮未见明显改变，内皮保持连续性、内膜完整、未见平滑肌增厚；模型组出现脂质沉积，部分内膜增厚，平滑肌紊乱、增生，内皮断裂，缺如；吡格列酮组内膜及平滑肌未见明显改变。2．2光镜显示形态学改变第八因子相关CD31抗体显示血管内皮细胞后采用光镜观察，对照组大鼠主nI摘要动脉内皮光滑平整，平滑肌组织分布均匀。模型组大鼠主动脉内皮组织大部脱落，平滑肌明显增生，排列紊乱，细胞肥大，垂直于内膜。吡格

7、列酮组主动脉内皮基本完好，偶有脱落，平滑肌细胞增殖不明显，排列规则，形态基本正常。2．3电镜血管内皮细胞超微结构改变对照组大鼠血管内皮细胞正常，胞浆内线粒体正常，胞核结构正常，内弹力膜连续，厚薄均匀，平滑肌细胞正常。模型组大鼠内皮细胞病变较重，胞膜破裂，胞质脱失、外溢或疏松变性，胞质内细胞器溶解或消失，胞核染色质疏松，电子密度减低，核膜不完整；内皮下纤维母细胞增生变，胶原纤维增多。内弹力膜中断，厚