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1、四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响作者：刘真,魏运湘,于慧卿,马秀娟,王强,李武卫,李永新【摘要】目的观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVE
2、C损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。【关键词】四妙勇安汤;缺氧;人脐静脉内皮细胞;血管新生 Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofSimiaoyongantangonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)injuryinducedbyhypoxia.MethodsTheHUVECsweredividedintonormalgroup,modelgroupandSimiaoyongantanggroup,andthehypoxia
3、modelwasestablishedatthelattertwogroups.ThelivabilityofHUVECswasmeasuredbyMTTassay.The10transudationofLDHinthemediumwasmeasuredbybiochemistryandthepositiveexpressionofVEGFwasdetectedbyimmunofuorescencechemistry.ResultsThelevelofLDHwasreducedsignificantlyandthecellactivityindicatedbyMTTwasincr
4、eased.ThenumberofthecellsstainedbyVEGFincreasedinthetreatmentgroupofSimiaoyongantang.ConclutionSimiaoyongantanghasprotectiveeffectonhypoxiainjuredHUVECs,whichmayberelatedtoitseffectofincreasingthecellslivability,reducingtheinjuryinducedbyhypoxia,up-regulatingexpressionsofVEGFandpromotingangio
5、genesis. Keywords：Simiaoyongantang;hypoxia;humanumbilicalveinendothelialcells;angiogenesis 自从Hockel等[1]提出了“治疗性血管生成”10的概念后,以促血管生长因子诱导心脑血管组织新生血管形成,已成为治疗性血管新生研究中最为活跃的领域。组织缺血缺氧后首先受到影响的是内皮细胞,因此,对内皮细胞的研究成为了研究缺血缺氧性疾病的重要手段。人脐静脉为体外获得内皮细胞的重要来源,故选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为实验对象。现代药理研究表明,四妙勇安汤能够扩张血管,疏通及促进血液循环,使
6、未闭塞的动脉及侧枝循环变粗、增多,已经广泛应用于治疗血栓闭塞性脉管炎。近年来研究表明,此方对心血管疾患疗效确切[2]。本实验从细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、血管内皮生长因子(VEGF)生成量3个方面观察了四妙勇安汤对缺氧HUVEC的影响。 1实验材料 1.1试剂 1640干粉(Gibco公司),明胶(Sigma公司),胎牛血清(杭州四季青公司),100U/mL青霉素、80?g/mL链霉素(华北制药),胰蛋白酶(Amersco公司),四乙酸乙二胺-二钠(disodiumedetate,EDTA),Earle液(河北医科大学),兔抗人Ⅷ因子相关抗原(bs-0332R,北
7、京博奥森生物公司),VEGF(北京博奥森生物公司),异硫氢酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记山羊抗兔多克隆IgG(ZF-0311,北京中杉金桥),HUVEC(KG110,南京凯基生物公司),四甲基偶氮唑蓝(MTT,Amersco公司),二甲亚砜(DMSO,Gibco公司),磷酸盐缓冲液(PBS,华瑞创新生物公司),LDH试剂盒(上海丰汇科技公司)。 1.2主要仪器 CO2培养箱(Thermo),倒置相差显微镜(Olympus),荧光显
