缺氧对体外滋养细胞及脐静脉内皮细胞中巢蛋白表达的影响

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1、缺氧对体外滋养细胞及脐静脉内皮细胞中巢蛋白表达的影响InfluenceofhypoxiaonNestinexpressioninvitrotrophoblasticcellsandumbilicalveinendothelialcells作者姓名：唐琳专业：妇产科学指导教师：马晓艳教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月30日中文摘要缺氧对体外滋养细胞及脐静脉内皮细胞中巢蛋白表达的影响目的：重度子痫前期（Severepreeclampsia,SPE）被认为是一种继发于胎盘缺氧的严重妊娠合并症，表现为妊娠20

2、周后出现高血压、蛋白尿及多组织功能损伤，严重危胁着母儿的生命与健康。巢蛋白（Nestin）是一种中间丝细胞骨架蛋白，参与神经细胞发育，是传统观念的神经干细胞标记物。近年来发现Nestin也参与血管的发生与维护，是新生血管内皮细胞标志物之一，其表达状况与缺氧环境有关。本研究利用缺氧诱导剂建立体外细胞缺氧环境，观察人绒毛膜上皮JEG-3细胞系和人脐静脉内皮细胞（Humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC）-两种胚胎干细胞在不同缺氧时间和缺氧程度中Nestin的表达状况，为胎盘缺氧在

3、SPE发生、发展中的作用提供实验依据。材料与方法：利用二氯化钴（CoCl2）模拟体外缺氧环境，分别诱导JEG-3细胞系及HUVEC化学缺氧。提取不同缺氧条件下各组细胞mRNA,在核酸水平上检测细胞Nestin基因的表达水平；同时收集各组细胞培养基，利用NestinELISA试剂盒检测细胞培养基中Nestin蛋白水平并进行统计学分析。结果1、缺氧对人绒毛膜上皮JEG-3细胞系中NestinmRNA及蛋白表I达的影响1）、JEG-3细胞系在CoCl2浓度为300umol/L化学缺氧条件下分别培养6h、12h、24h及

4、48h,后三者NestinmRNA表达量均明显高于6h者（P<0.01）。JEG-3细胞系在CoCl2浓度300umol/L的缺氧环境中培养24h,与未加入CoCl2的培基中培养24h者比较，NestinmRNA表达量增加（P<0.05）。随着缺氧时间的延长，培养基中Nestin蛋白水平逐渐降低，其中6h与48h之间Nestin蛋白水平差异有统计学意义（P<0.05）。JEG-3细胞系在CoCl2浓度300umol/L培养基中培养24h,与未加入CoCl2的培基中培养24h者比较，培养基中Nestin蛋白水平下降

5、，但无统计学意义（P>0.05）。2）、JEG-3细胞系在CoCl2培养基中培养24h，随着CoCl2浓度增加，NestinmRNA表达水平变化不大（P>0.05）；培养基中Nestin蛋白水平也无统计学差异（P>0.05）。2、缺氧对人脐静脉内皮细胞-HUVEC中NestinmRNA及蛋白表达的影响1）、HUVEC在CoCl2浓度300umol/L化学缺氧条件下，随着缺氧时间延长，12h、24h及48h者NestinmRNA表达量均显著高于6h（P<0.01）。CoCl2浓度300umol/L化学缺氧24h，与

6、未加入CoCl2化学缺氧情况者比较，NestinmRNA表达量增加（P<0.05）。随着缺氧时间延长，HUVEC培养基中Nestin蛋白水平无明显变化（P>0.05）。CoCl2浓度300umol/L化学缺氧24h，与未加入CoCl2化学缺氧情况者比较，培养基中Nestin蛋白水平下降（P>0.05）。2）、HUVEC在CoCl2化学缺氧条件下培养24h，其浓度在400umol/L时NestinmRNA表达量高于200umol/L及600umol/L（P<0.05；P<0.01），CoCl2浓度在600umol/

7、L时NestinmRNA表达量II低于200umol/L者（P<0.01）。随着CoCl2浓度增加，Nestin蛋白浓度无明显改变（P>0.05）。结论1、短时间慢性缺氧可以促进NestinmRNA在滋养细胞和胎盘血管内皮细胞中表达，可能与子痫前期发病过程中机体应对缺氧的保护性机制有关。2、慢性缺氧时间（一定范围内）延长是影响Nestin在滋养细胞中表达的不利因素，可能与子痫前期患者胎盘浅着床及血管重塑功能障碍有关。3、慢性缺氧时间（一定范围内）延长对Nestin在胎盘血管内皮细胞中长时间表达及其细胞保护功能起到

8、支持作用。4、慢性缺氧程度（一定范围内）对Nestin在滋养细胞中表达影响较弱。慢性缺氧程度稍加重可促进NestinmRNA在胎盘血管内皮细胞中表达，但缺氧程度明显加重可能是限制NestinmRNA在胎盘血管内皮细胞中表达的不利因素。关键词：重度子痫前期,巢蛋白,缺氧,滋养细胞,胎盘血管内皮细胞IIIAbstractInfluenceofhypoxiaonNestinex