adma对人脐静脉内皮细胞lox-1表达的影响及pdtc作用

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1、creasedinthegroup，whichtheendothelialcellswastreatedbyPDTCandAD—MAfor24hoursthanthe15iLLmol／1ADMAgroup．100jxmol／LPDTCcande—gradetheexpressionofbothutmostly．Theexpressinofbothwashigherinthe150p．m01／1PDTCgroupthantheIOOwmol／LPDTCgroup．Conclusion1．ADMAcanenhancementASthroughactivatehu

2、manumbilicalveinendo—thelialcellsNF—KB，up—regulatetheexpressionofLOX一1，anddamageen—dothelialfunction．2．SomedensityPDTC．theidio—inhibitorofNF—KB，caninhibitthein-fluenceofADMAOilexpressionofhumanumbilicalveinendothelialcellsNF—KBandLOX一1significantly，andcanprotectandimproveendothelia

3、lcellsduringtheASprocess．Kevwordsatherosclerosis；endothelialeel；endothelialnitricoxidesynthase·5··6·一匾一缩一垂～一、-●．、，’’、；论文{、⋯一⋯一一一．一√，ADMA对人脐静脉内皮细胞LOX一1表达的影响及PDTC的作用刖昌内皮细胞功能紊乱是动脉粥样硬化(AS)和高血压等多种心血管疾病发生发展的基础。内皮一氧化氮合酶(eNOS)对NO及O。的生成起重要作用，eNOS的抑制是内皮细胞功能紊乱的标志⋯。内皮依赖的血管舒张功能的减弱可加速AS病变的发展，并在血

4、管造影呈现阳性结果之前被检测出来口J。导致内皮功能紊乱的机制之一即为内源性NOS抑制剂的积聚日1。不对称二甲基精氨酸(ADMA)是近年来发现的一种内源性eNOS竞争性抑制剂，这一抑制剂的血浆水平在患有AS和具有AS危险因素的患者中升高，在这些病人中，血浆ADMA水平与内皮功能紊乱和AS的严重程度相关‘“。内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX一1)主要表达于血管内皮细胞，病理条件下特异地结合、吞噬氧化型低密度脂蛋白(0x—LDL)，并进一步介导OxLDL促进血管内皮功能失调、参与泡沫细胞形成、刺激血管平滑肌细胞增殖及诱导调亡等多种致AS作用¨1。最

5、近研究发现ADMA可引起LOX一1表达上调怕1，亦有研究发现LOX一1的引物序列中含有核转录因子NF—KB的结合位点⋯，但在ADMA引起LOX一1表达上调过程中NF—KB的确切作用还未见研究证实。本实验通过ADMA干预人脐静脉内皮细胞并观测LOX—l表达的变化，同时应用NF—KB的特异抑制剂(PDTC)探讨NF—KB在这一过程中可能的调控作用。材料和方法一、实验材料1．实验细胞：人脐静脉内皮细胞ECV304细胞株，购自武汉大学中国典·7·型培养物保藏中心。2．主要实验仪器：(1)日本SANYO公司低温冰箱(2)TGl6一W5台式高速离心机(3)DYY一6B型

6、稳压稳流电泳仪(4)722可见分光光度计(5)医学图像分析系统：OlympusSZXDPl0BX41‘照相系统，MetaMorphImageSystem分析系统3．主要试剂：(1)ADMA粉：美国Sigma试剂公司生产(2)PDTC粉：美国Sigma试剂公司生产(3)LOX一1引物序列：日本Takara公司合成(4)p—aetin引物序列：日本Takara公司合成(5)RT—PCR试剂盒：日本Takara公司(6)NF—KBp65兔抗人多克隆抗体：武汉博士德生物工程有限公司提供(’力其它：RPMll640培养基、胎牛血清(FBS，Gibco公司)；异硫氰酸胍

7、(Triz01)(上海生工)、溴化乙啶(EB，华美公司)。二、实验方法(一)细胞培养及分组1．细胞培养：ECV304细胞株，0．25％胰蛋白酶消化传代，10％胎牛血清的RPMll640培养液，37℃、0．5％c0：孵箱内培养。用于实验前给予无血清的培养基饥饿处理24小时，后加入不同处理因素培养24小时。2．实验分组：(1)空白对照组(2)ADMA3p,mol／l组(3)ADMA10txmol／1组(4)ADMA15p．．mol／1组(5)ADMA15p．．mol／1+PDTC50p．mol／1组(6)ADMA15ixmol／1+PDTC100p。mol／1组

8、(7)7ADMA15tzmol／1+PDTC150p