全氟化碳对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

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1、分类号：R541.4密级：不保密UDC：616-02学校代码：11065硕士学位论文全氟化碳对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响陈登勇指导教师庞继恩教授学科专业名称内科学（心血管病）论文答辩日期2015年05月30日全氟化碳对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响摘要目的建立体外缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）损伤模型，通过观察全氟化碳(perfluocarbon，PFC)对人脐静脉内皮细胞（Humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs）缺氧/复氧损伤的保护作用及其调控机理，深入理解和阐释PFC的

2、生物学效应及作用机制，为其在心肌缺血再灌注损伤中的临床应用提供更为客观和充分的理论依据。方法采用化学方法(连二亚硫酸钠溶液法)制备缺氧/复氧(H/R)损伤模型。实验分组为：对照组、10%PFC组、H/R组、PFC+H/R处理组（5%、10%、20%）(以上均为培养液体积比)。CCK-8法测定细胞活力；比色法依次检测细胞培养基中乳酸脱氢酶（Lactatedehydrogenase，LDH）外漏量，胞内丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、一氧化氮（Nitricoxide，NO）的含量及超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）的活性；

3、蛋白质印迹法（WesternBlot，WB）分析细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果与对照组相比，10%PFC组中各待检指标差异均不明显（P＞0.05）。相比与模型组，10%、20%PFC处理组能提高细胞活力A、降低胞内NO含量及减少Caspase-3的表达（P＜0.05）；5%、10%、20%PFC处理组能显著降低LDH外漏量、胞内MDA含量及提高SOD的活性（P＜0.01）。结论（1）缺氧/复氧损伤可导致细胞内氧化应激的发生，并进而出现细胞坏死和凋亡；（2）PFC对HUVECs缺氧/复氧损伤具有明显的保护作用，其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应,增强细

4、胞抗氧化和凋亡能力有关。关键词全氟化碳；缺氧/复氧；内皮细胞；氧化应激；凋亡Effectsofperfluorocarbononhypoxia/reoxygenationinjuryofhumanumbilicalveinendothelialcellsAbstractObjectiveEstablishinghypoxic/reoxygenation(H/R)injurymodel,andtheninvestigatingtheprotectiveeffectandtheregulationmechanismofPerfluocarbon(PFC)onHumanu

5、mbilicalveinendothelialcells(HUVECs)inthemodelofhypoxia/reoxygenationinjury.ToprovideamoreobjectiveandadequatetheoreticalbasisforthePFC’sclinicalapplicationinthemyocardialischemia-reperfusioninjury,throughtheobserveofPFC’sbiologicaleffectsandmechanism.MethodsH/Rmodelswereestablishedbys

6、odiumhydrosulfite,andtheexperimentwasdividedinto6groups:controlgroup,PFCgroupwithPFCata10%volume,H/Rgroup,PFC+H/Rtreatmentgroup(thevolumeratiosofculturemediumwere5%,10%,20%).ThecellviabilitywasdetectedbyCCK-8method.Thecontentsofmalondialdehyde(MDA),nitricoxide(NO)andtheactivitiesofsupe

7、roxidedismutase(SOD)incells,aswellasthelactatedehydrogenase(LDH)intheculturemedium,weremeasuredbybiochemistryapproaches.Theexpressionofapoptosis-relatedproteinCaspase-3wasanalyzedbyWesternblotting(WB).ResultsComparedwiththecontrolgroup,everydetectedindexesof10%PFCgrouphadnostatistica