复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

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1、复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用【摘要】目的　观察复方通络胶囊对缺氧-复氧所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs，建立缺氧-复氧模型，倒置显微镜观察细胞形态，采用MTT法测定细胞存活力，检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果复方通络胶囊能明显减轻缺氧-复氧所致细胞形态学的改变、抑制内皮细胞损伤、明显减少LDH的释放(P<0.05，P<0.01)。结论复方通络胶囊对HUVECs损伤有明显的保护作用。【关键词】复方通络胶囊;内皮细胞;缺氧-复氧;保护作用　　ToobservetheprotectiveeffectofFufang

2、tongluocapsuleonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)injurycausedbyhypoxia-reoxygenation.MethodsHUVECswereculturedinvitrotobuildthehypoxic-reoxygenationmodel，thenweobservedcellmorphologybyinvertedmicroscope，anddeterminatedcellviabilitybyMTT，anddetectedlactatedehydrogenase(LDH)levelincellculture

3、medium.ResultsFufangtongluocapsulecansignificantlyinhibitcellmorphologychangeandendothelialcellinjurycausedbyhypoxia-reoxygenationandeffectivelyreduceLDHrelease(P<0.05，P<0.01).Conclusion8Fufangtongluocapsulehasobviouslyprotectiveeffectonhumanumbilicalveinendothelialcellsinjury.　　[Keywords]fufa

4、ngtongluocapsule;endothelialcells;hypoxia-reoxygenation;protectiveeffect　　缺氧-复氧在卒中、心肌缺血等疾病病理生理过程中扮演着重要角色[1]。复方通络胶囊是以滋养肝肾、化痰消瘀为法所制定的中药复方，由首乌、黄精、海藻、僵蚕、天麻等组成。前期研究表明其对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)大鼠有预防性脑保护作用。本研究通过体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，建立缺氧-复氧模型，观察细胞形态，采用MTT法测定细胞存活力，检测细胞培养液中LDH水平，探讨其对血管内皮细胞是否有保护作用。　　1材料与方法　　1.1药品、试剂复方

5、通络胶囊，生药1.5g/ml，南京市中医院提供;丹参注射液，正大青春宝药业有限公司，批号：0502181;RPMI1640培养基，Gibco产品;完全DMEM培养基，Gibco产品;二甲基亚砜　　(DMSO)，上海凌峰化学试剂有限公司;新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司，批号：051120;胰蛋白酶(1∶8250)，Amresco分装;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20050304;连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，上海化学试剂采购站经销，批号90878;MTT[溴化-(4，5-二甲-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑]，Amresco分装。　　1.2仪器CK

6、40倒置显微镜，OLYMPUS，JAPAN;超净工作台，苏州净化设备厂;DG3022A型酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品;752分光光度计，上海光谱仪器有限公司。　　1.3实验细胞HUVECs细胞，购于中科院上海细胞库。　　1.4方法　　1.4.1HUVECs的培养及氧化损伤模型的建立HUVECs按常规方法复苏后接种于40ml培养瓶中，培养液为含10%新生牛血清的RPMI1640培养液，37℃、95%O2、5%CO2条件下培养，待细胞长满瓶底后，倒掉培养液，用PBS轻轻荡洗两次，加入0.25%胰蛋白酶37℃消化2～3min，用新生牛血清终止消化，吸管轻轻吹打数次，使细胞完全分散，倒置显微镜下观

7、察，计数，将细胞浓度调整为1×108个/L的细胞悬液，接种于细胞培养板上(96孔、24孔)同样条件下继续培养，待细胞长满单层融合后，弃去上清，以含0.5%血清的培养液培养248h，使其同步化生长。HUVECs同步化生长后，换用无血清的1640培养液，除正常对照组外加入终浓度为1mmol/L的Na2S2O420μl作用2h，吸去培养液，用D-Hank’s液洗两次，然后加入无血清的DMEM200μl，