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《医药学论文-《舒心胶囊对抑制缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用》》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、医药学论文:《舒心胶囊对抑制缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用》-->医药学论文:《舒心胶囊对抑制缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用》[摘 要] 观察舒心胶囊对缺氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及相关基因表达的影响。体外培养人脐静脉内皮细胞,建立缺氧模型,以透射电子显微镜技术、流式细胞术(膜联蛋白v/碘化丙啶)双染色鉴定细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、bcl-2及p53蛋白表达。代写硕士论文缺氧培养12h后,电镜显示细胞呈典型凋亡形态,双染色流式细胞仪检测凋亡细胞比例(13.03%±0.96%)显著高于正常
2、组(4.47%±0.64%)(P[关键词] 中药学; 舒心胶囊对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响; 细胞培养; 内皮细胞; 流式细胞仪; 基因表达; 舒心胶囊血管内皮细胞功能异常是冠状动脉粥样硬化的重要环节,有研究提示内皮细胞功能异常可能参与急性冠状动脉综合征的发病过程[1]。因此国内外学者都在积极探索和研究保护内皮细胞免受损伤的药物。舒心胶囊是我院治疗冠心病的多年验方,临床疗效确切,其功用重在益气养阴、活血通痹,由黄芪、麦冬、丹参、郁金等药物组成。本研究通过观察舒心胶囊对缺氧诱导内皮细胞凋亡及相关基因表达
3、的影响,尝试探讨其改善内皮细胞功能的部分机制。1.材料与方法1.1 人脐静脉内皮细胞的培养及实验分组人脐静脉内皮细胞株ECV304(中国预防医学科学院提供),用含10%胎牛血清的DMEM培养基(GIBCO公司)培养,第3~5代用于实验,接种于24孔培养板(1×105/孔),换用无血清DMEM液培养12h使细胞同步化。然后进行分组处理:①正常组:继续用无血清DMEM液培养12h;②舒心胶囊组:用含5g/L舒心胶囊原液(由浙江中医学院制剂研究中心提供,用水煎醇提法制备,每毫升含生药1g)的无血清DMEM液
4、继续培养12h;③缺氧组:于缺氧装置中用无血清DMEM液继续培养12h;④缺氧+舒心胶囊组:于缺氧装置中用含5g/L舒心胶囊原液的无血清DMEM液继续培养12h(缺氧装置参照文献[2],持续通入95%N2、5%CO2的混合气体,多次抽气进行分析,氧分压1.2 透射电镜观察弃去上清液,用无钙镁Hank液洗涤,加0.08%胰蛋白酶(华美公司)消化,离心,收集细胞。用2.5%戊二醛及1%四氧化锇固定,乙醇脱水,包埋,超薄切片,染色,透射电镜下观察。1.3 膜联蛋白V/碘化丙啶标记染色检测早期凋亡细胞实验条件
5、下置5%CO2培养箱37℃孵育,收获细胞,调整细胞数为1×109/L。用冷PBS洗1遍后置0℃水浴中,加490μL结合缓冲液,轻轻混匀细胞后加5μLFITC-AnnexinV和5μLPI(AnnexinV和PI试剂均系Immunotech公司产品)(AnnexinV:膜联蛋白V;PI:碘化丙啶)。10min后上流式细胞仪(EPICS-XL型,Beckman-Coluter公司产品)检测。细胞经膜联蛋白V/碘化丙啶双染色后上机检测,可被区分为不同的细胞:右上象限为碘化丙啶和膜联蛋白v均阳性的凋亡晚期及死
6、细胞;左上象限为碘化丙啶阳性、膜联蛋白v阴性的机械损伤细胞;左下象限为碘化丙啶和膜联蛋白v均阴性的活细胞;右下象限为碘化丙啶阴性、膜联蛋白v阳性的凋亡细胞。1.4 p53、bcl-2和Fas蛋白的检测p53、bcl-2和Fas单抗均购自Immunotech公司,克隆号分别为PAB240、83-8B和PAB240;具体检测参照试剂盒说明书,采用流式细胞仪检测。1.5 统计学处理实验结果以x±s表示,数据处理采用方差分析,P2. 结果2.1 透射电镜观察正常组及舒心胶囊组细胞形态正常,细胞核形态规则,核仁
7、清晰。缺氧组细胞则呈现凋亡典型形态,细胞体积缩小,胞膜完整,细胞核形态不规则,核仁消失,核染色质浓聚,胞浆浓缩,部分细胞质中有大小不一、数量不等的空泡形成,并可见凋亡小体。缺氧+舒心胶囊组细胞形态接近正常细胞。2.2 膜联蛋白V/碘化丙啶染色和Fas、bcl-2和p53蛋白检测缺氧培养12h后,缺氧组凋亡细胞比例显著高于正常组(P0.05);舒心胶囊组与正常组相比亦无显著性差异(P>0.05)(表1和图2,Table1andFigure2)。与正常组相比,缺氧组bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05)
8、,p53蛋白表达仍存在显著性差异(P0.05);Fas表达各组间均无显著性差异(P>0.05)。3. 讨论血管内皮细胞功能异常贯穿了动脉粥样硬化发生、发展的各个阶段,同时也是动脉粥样斑块破裂、血栓形成的促发因素之一。当内皮细胞受损时,内皮细胞的调节功能出现异常,从而影响血管紧张度、血管炎性改变、粥样斑块稳定性及血栓形成[3]。内皮细胞过度凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,而缺氧能够加速内皮细胞凋亡,从而加重内皮功能的失调[4],因此对缺氧内皮细胞的保
