阿魏酸钠对Ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用与机制.pdf

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1、l62世界最新医学信息文摘2014年第14卷第24期·医学检验·阿魏酸钠对Ox．LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用与机制袁超睿，游路，汪少开(1．牡丹江市中医医院，黑龙江牡丹江157000；2．锦州医学院，辽宁锦州121017)摘要：目的阿魏酸钠(Sodiumferulate)是传统活血化瘀中药当归、川芎等的主要成分，具有抗脂质过氧化和抗细胞凋亡等作用。本研究的目的是探讨其对氧化低密度脂蛋白(Ox．LDL)诱导的细胞凋亡的作用机制。方法培养人脐静脉内皮细胞，应用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖凋’亡，应用Westernblot检测蛋白表达情况。结果应用不同浓度(25

2、、50、100mg／L)阿魏酸钠处理后，Ox．LDL对内皮细胞增殖的抑制作用减低，且这一效应呈剂量依赖性；不同浓度(25、50、100mg／L)阿魏酸钠能够有效降低0x．LDL诱导的细胞凋亡，同时抑制Caspase．3蛋白的表达。同时，阿魏酸钠能够有效抑制0x．LDL诱导的p38MAPK蛋白表达增加。结论阿魏酸钠通过抑制p38MAPK通路发挥内皮保护作用，提示其可能对动脉粥样硬化有潜在的临床治疗作用。关键词：阿魏酸钠；内皮细胞；Ox。LDL；p38MAPK中图分类号：I也85文献标识码：BDOI：10．3969／j．issn．1671．3141．2014．24．1210引

3、言进行单因素方差(ANOVA)、组间，检验，尸<0．O5表示有显动脉粥样硬化(atheroselerosis，AS)已成为当前危著性差异。害人类最大的心血管疾病之一，其所致的动脉粥样硬化性2结果心血管疾病的发病率和死亡率日益增加⋯。因此，筛选2．1阿魏酸钠对Ox．LDL处理的内皮细胞增殖的影响有效的预防和治疗动脉粥样硬化的药物，并探讨其作用机制，寻找敏感的靶向目标显得十分必要。为此，本研究将1．5探讨阿魏酸钠对Ox—LDL诱导人脐静脉内皮细胞(Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC)损伤的保护作1．0用，为有效发挥SF的临床应用价

4、值提供新的理论和实验辫^o／0v嚣依据。l材料与方法毫0．51．I主要试剂和仪器熏。．。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和二甲基亚砜(DMS0)为Amresco公司产品；Ox—LDL、胰蛋白酶和1640培养基为Sigma公司产品；新生牛血清(NCS)为杭州四季青产品。阿魏酸钠购自湖北万邦伟业医药化工有限公司。Ox-LDL+嗍钠1．2细胞培养人脐静脉内皮细胞株由上海丰寿实业有限公司提供，细胞培养于10％FBSRPMI1640培养基，含两种抗生素：图1．MTT法检测阿魏酸钠(25、50、100mg／kg)对青霉素和链霉素(浓度均为100／mL)，放置于37℃、Ox—LDL处理的内皮细

5、胞增殖的影响。N=5。，与对照组50mL／LCO，饱和湿度环境，每2-3d换用新鲜培养液，取比较P<0．05；#，与Ox—LDL组比较P

6、mg／mL)，37℃继续孵育4h，在ELISA仪上于490nm波长读取吸光度．1．4细胞凋亡检测根据细胞增殖结果，选择凋亡检测最佳时间点，胰酶消化细胞成单一细胞悬液，转速1000r／min，离心10min，PBS洗3遍，加入700mL／L乙醇5mL4℃固定过夜，PBS洗2遍，1g／LRNAse37oC，应用PI4℃孵育1h，用流式Ox-LDL~阿撇钠细胞仪检测凋亡细胞数量。1．5Westernblot检测使用细胞裂解液于冰上裂解细胞，收集上清液，采用福图2．阿魏酸钠(25、50、100mg／kg)对Ox—LDL处理林酚法测定蛋白含量。的内皮细胞凋亡的影响。N=5。，与对照

7、组比较P<0．05；#，1．6统计学分析与Ox—LDL组比较P<0．05。实验数据以mean±SD表示，应用SPSS10．0统计软件2．3阿魏酸钠对Ox-LDL处理对Caspase3蛋白表达的世界最新医学信息文摘2014年第l4卷第24期163影响图4．阿魏酸钠(25、50、100mg／kg)对Ox—LDL处理的内皮细胞中p38MAPK表达的影响。N=4。，与对照组Caspase-3一《。比较P<0．05；撑，与Ox—LDL组比较P<0．05。GAPDH嘲__’3讨论动脉粥样硬化的发病机理非常复杂，目前尚未完全阐明，曾有多种学