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《姜黄素对棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、姜黄素对棕扌闾酸诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用周香梅刘康刘保林黄芳(通讯作者)(中国药科大学中药药理实验室江苏南京211198)【摘要】目的:研究姜黄素对棕柵酸(PA)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:以体外培养的HUVECs为研究对象，建立PA诱导的胰岛素抵抗模型,观察姜黄素对其保护作用。结果:经姜黄素预处理的HUVECs能显著改善PA诱导的损伤，改善胰岛素抵抗。结论:姜黄素对PA诱导的HUVECs损伤具有一定的保护作用。【关键词】姜黄素HUVECs炎症胰岛素抵抗【中图分
2、类号】R285.5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)08-0156-02胰岛素抵抗(IR)是II型糖尿病的重要标志和诱因，牛理状态下胰岛素和胰岛素受体结合后经胰岛素受体底物J(IRS-1)和磷脂酰肌醇・3■激酶(PI3K)将信号向下游传递，通过IRS-l/PI3K/AKt/eNOS途径产牛NO,维持血管内皮的自稳态。PA可以诱导HUVECs氧化应激及炎性反应的发牛，直接下调IRS-l/PI3K/AKt/eN0S通路，导致NO产牛减少诱导胰胡素抵抗的发牛［1］。姜黄素在整体动物实验中
3、对糖尿病具有改善作用⑵，本研究通过应用PA诱导的HUVECs胰岛素抵抗进一步观察在机制方面的保护作用。1实验材料1.1药品与试剂姜黄素，泽朗医药；水杨酸钠，上海凌风化学试剂有限公司；棕稠酸，国药集团化学试剂有限公司；DMEM培养基，胎牛血清，胰酶,Gibco公司；胰甜素注射液，万邦生化医药股份有限公司；NO、ROS荧光探针试剂盒，碧云天牛物技术研究所；IRS-l/PI3K/AKt/eNOS通路蛋白的抗体上海康城牛物工程有限公司。1.2实验细胞人脐静脉内皮细胞椒HUVECs)购于中国科学院上海细胞库2实验方
4、法2.1PA诱导的HUVECs胰岛素抵抗模型的建立选用生长良好的HUVECs,以2×104个/mL接种于48孔板住长至80・90%融合时，换用无血清培养基同步化后加入PA(100μM)作用30mino2.2实验分组：空白对照组(Blank)：HUVECs用DMEM/F12培养基孵育lh；PA组(Control)：HUVECs用DMEM/F12培养基孵育30min后，加入PA继续孵育30min；姜黃素组：HUVECs用姜黄素(50,100z200μM)预孵育30min后，加入PA继续
5、孵育30min；水杨酸钠组:HUVECs用水杨酸钠(5mM)预孵育30min后，加入PA继续孵育30mino2.3试验指标测定2.3.1NO荧光测定PBS清洗三次，加入100μL终浓度5μM探针,37°C孵育30min后清洗细胞三次，去除未进入细胞内的探针，加入胰岛素(终浓度0.1μM)37°C避光孵育5min,吸弃孔内液体，加入100μL2%多聚甲醛于4°C避光处固定5min,于荧光显微镜495nm激发波长、515nm发射波长处观察荧光并拍照［3］。2.3.2Westernblo
6、t检测PI3K/lkkβ通路蛋白的表达聚丙烯酰胺凝胶电泳3h,转膜45min,5%脱脂奶粉室温封闭2h,—抗4°C过夜,TBST洗10min×3次，二抗室温下孵育4h,TBST洗15min×3次，加ECLPlus发光试剂，放入X■光片夹中，暗处反应成像。2.4实验数据统计方法图像采用图象处理系统(Image-ProPlus6.0)分析光密度值'所有数据均以mean±SD表示，并用Student’s-1进行分析,*p<0.05表示有显著性差异
7、。3实验结果3.1姜黄素对PA诱导HUVECs释放NO的影响PA刺激下,HUVECs对胰岛素的敏感性降低，导致NO含量下降。姜黄素能够对抗PA的作用，有效恢复胰岛素介导的NO的生成。3.2姜黃素对PA诱导的HUVECsPI3K/lkkβ通路蛋白表达的影IRS-1的丝氨酸磷酸化是连接炎症对胰岛素信号通路损伤的关键反应。PA通过引起炎性反应引发的IKKβ活化,继而诱导IRS・1丝氨酸(Ser307)磷酸化增加来干扰胰岛素在内皮细胞内的信号通路的转导[4]。姜黄素能够抑制PA诱导的IRS-1
8、丝氨酸磷酸化，上调eNOS/AKt磷酸化，有利于胰岛素信号通路向下游传递,结果如图。4讨论炎症与胰岛素抵抗的联系体现在IRS-1的丝氨酸磷酸化，炎性因子可以使IRS-1的丝氨酸磷酸化后影响下游PI3K通路的信号传递⑸。PA刺激后，可以诱导炎症的产生，经过IRS-l/PI3K/AKt/eNOS通路，产生胰岛素抵抗。姜黄素可以通过减少丝氨酸磷酸化”恢复AKt和eNOS磷酸化，增强胰岛素介导的NO生成，改善PI3K信号通路，对血管内
