黄芪多糖缓解棕榈酸诱导内皮细胞损伤的作用及机制研究

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1、分类号：R2单位代码：10343学号：151002509）硕士学位论文论文题目:黄芪多糖缓解棕榈酸诱导内皮细胞损伤的作用及机制研究研究生姓名胡兰兰吴蓓蓓学科专业中西医结合临床类型专业型指导教师胡臻教授单小鸥教授二O一八年六月论文题目:黄芪多糖缓解棕榈酸诱导内皮细胞损伤的作用及机制研究答辩委员会主席：林胜璋教授浙江大学附属第一医院答辩委员会成员：刘长宝教授温州医科大学附属第二医院谷峰教授温州医科大学眼视光医院论文答辩日期：2018年05月25日温州医科大学硕士学位论文目录缩词简表………………………………………………………………1中文摘要……………………………………………………………

2、…2英文摘要………………………………………………………………4前言……………………………………………………………….6材料与方法…………………………………………………………..7实验结果……………………………………………………………..8讨论与分析………………………………………………………….10结论..................................................................................................11正文参考文献……………………………………………………….12附录…………………………

3、……………………………………..15致谢………………………………………………………………..16综述………………………………………………………………..17综述参考文献……………………………………………………….26独创性声明………………………………………………………….33温州医科大学硕士学位论文缩词简表英文名称英文缩写中文名称AstragaluspolysaccharidesAPS黄芪多糖DimethylsulfoxideDMSO二甲基亚砜PalmiticacidPA棕榈酸HumanumbilicalveinendothelialcellsHUVECs人脐静脉内皮细胞Nitr

4、icoxideNO一氧化氮ReactiveoxygenspeciesROS活性氧簇EndothelialnitricoxidesynthaseeNOS一氧化氮合酶NADPHoxidaseNOXNADPH氧化酶Adenosinemonophosphate-activated磷酸腺苷活化的蛋白proteinkinaseAMPK激酶AtherosclerosisAS动脉粥样硬化Intercellularadhesionmolecule1ICAM-1细胞间黏附分子-1Vascularendothelialadhesionmolecule-1VCAM-1血管内皮黏附分子-11温州医科大学硕

5、士学位论文黄芪多糖缓解棕榈酸诱导内皮细胞损伤的作用及机制研究中文摘要背景及目的黄芪多糖是从传统中药黄芪中提取的有效活性成分之一，已有研究表明黄芪多糖可以促进一氧化氮（NO）的生成，改善NO与活性氧簇（ROS）之间的平衡，提高NO的生物活性，改善血管内皮功能障碍，保护血管内皮细胞，然而黄芪多糖对NO生成的调控机制并未完全阐明清楚。本研究以棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤，建立内皮细胞损伤模型，主要从细胞层面上来探索黄芪多糖对内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法：1.取黄芪多糖（APS）粉末按不同浓度要求溶于PBS溶液，分别配成浓度为400mg/L、800mg/L及1600mg/L的溶液

6、用于实验。2.人脐静脉内皮细胞（HUVECs）用含有10%胎牛血清及100U/mL盘尼西林的DMEM高糖培养液、在条件为37℃，5%CO2的培养箱中培养。3.将细胞随机分为正常对照组，模型组，APS（400mg/L）组，APS（800mg/L）组，APS组（1600mg/L），各加入250mmol/L的棕榈酸建立HUVECs细胞损伤模型，并依次加入不同浓度等量的APS溶液共同孵育24小时。4.MTT试验检测黄芪多糖细胞毒性：取HUVECs细胞悬液，以细胞数约5000个/孔接种于96孔培养板，每6孔一组，实验组分别加入不同浓度APS溶液，对照组加入等量的PBS溶液，培养24小时。每

7、孔按要求加入MTT试剂及二甲基亚砜（DMSO）溶液，于酶标仪460nm波长下检测各组的吸光度,间接比较各组细胞的生存率（%）。5.Westernblotting检测：提取不同实验组及对照组细胞蛋白，采用蛋白印交实验检测细胞内AMPK、p-AMPK、p-Akt、eNOS、p-eNOS、NOX4、ICAM-1、VCAM-1、GAPDH蛋白的表达。6.RT-qPCR检测：提取不同实验组及对照组细胞RNA,用RT-qPCR技术定量检测不同组别内eNOS、NOX4及β-actin的mRNA