profilin-1在ages诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制研究

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1、万方数据巾图分类弓UDCR54610博士学位论文学校代码!Q5三三密级坌珏profilin—l在AGEs诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制研究Involvementofprofilin--1inAGEs--inducedvascularendothelialcellinjuryandmechanism作者姓名：李振：≠学科专业：临床医学研究方向：心血管内科院、系(所)：湘雅医院指导教师：杨天伦教授论文答辩口期净聋!￡±7答辩委参，会t席张中南／j<学：零，‘四年F一丘月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本

2、人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也彳i包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作r明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：日期：监年』月望日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位沦文被查阅

3、和借阅；学校可以将本学位论义的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和l汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：l期：巡年三月i日／导师签名：}：{期：丛年三月生H万方数据profilin—I在AGEs诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制研究摘要第一章Profilin．I在AGEs诱导的内皮损伤中的作用研究背景糖尿病(diabetesmellitus，DM)发病率逐年上升，糖尿病血管病变引发的并发症是糖尿病致残、致死的主要原因之一。而糖尿病患者若长期处于高血糖状态后，即使日后长期严格控

4、制血糖，糖尿病相关的慢性并发症仍继续存在甚至发展，这种现象称为“代谢记忆(metabolicmemory)”或“高血糖记。}L(hyperglycemicmemo巧)”。大量研究显示，若糖尿病患者血糖长期得不到很好的控制，其体内的糖基化终产物(advancedglycationendproducts，AGEs)经过一系列的非酶糖化、脂质氧化而产生，导致晚期糖基化终产物(晚期糖化终产物，AGEs)的生成会增加，这些因素可能是生成的“代谢记忆”的主要原因。AGEs介导的“代谢记忆”致血管病变的机制尚未完全阐明。Profilin．1是

5、一种小分子量的肌动蛋白结合蛋白，广泛存在于除骨骼肌之外的机体组织，可调节肌动蛋白聚合及解聚过程；参与调节细胞的增殖、分化和运动过程以及信号转导。体外研究显示：AGEs可引起内皮细胞骨架肌动蛋白的重组和再分布，导致内皮细胞通透性增加，提示profilin．1可能是AGEs诱导的内皮细胞损伤的靶分子。本章主要体外培育人脐静脉内皮细胞，通过外源性的AGEs刺激内皮细胞，观察AGEs对于内皮细胞的损伤作用，同时观察profilin．1在AGEs刺激内皮细胞中的表达。方法培养人脐静脉血管内皮细胞株，分别用不同浓度(100mg／1，万方数据

6、200mg／1，400mg／1)AGEs处理24小时；继而选用使用AGEs(200mg／1)处理内皮细胞不同时间(6h，12h，24h，48h)；使用AGEs(200mg／l，24小时)处理人脐静脉内皮细胞后，分别检测细胞上清液NO、ADMA、ICAM一1因子水平，免疫荧光染色检测F—actin的分布和Profilin．1的表达，Westernblot检测profilin一1蛋白表达，共聚焦扫描显微镜直接观察活性氧的改变。结果1、不同浓度的AGEs(100mgO．、200mgm、400mg／L)孵育内皮细胞24h均可使Profi

7、lin．1蛋白表达上调，但以200mg／L明显。2、200mg／L的AGEs呈时间依赖性的上调内皮细胞Profilin-1的蛋白表达，后续实验均选用200mgm作用内皮细胞24小时。3、AGEs诱导的profilin．1对内皮细胞结构的改变。4、AGEs(200mgm)处理内皮细胞24h可显著升高细胞培养上清液中ADMA、ICAM．1水平，降低NO水平。5、AGEs(200mgm)处理内皮细胞24h后，细胞形态变得很不规则，绿色荧光明显增加，提示AGEs明显增加细胞内活性氧水平。结论Profilin一1在AGEs介导的血管内皮损

8、伤过程中起到关键的作用。关键词：糖基化终产物，profilin-1，人脐血管内皮细胞III万方数据第二章Profilin．1基因沉默后AGEs诱导的内皮细胞的表达研究背景糖尿病血管病变的发病机制复杂，迄今仍未阐明。目前普遍的观点认为：长期的高血糖使线粒体功能下降