profilin-1在ages诱导的血管重塑中的作用及机制研究

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1、中图分类号R5垒!：垒UDC610●———————————_—一学校代码!Q53三密级公珏八年制博士学位论文ProfiI-n-1在AGEs诱导的血管重塑中的作用及机制研究Effectofprofilin一1onvascularremodelinginducedbyAGEsandpossiblemechanism作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：马丽平临床医学心血管内科湘雅医院杨天伦教授陈美芳论文答辩日期苎竺基魁虿盆答辩委员会主席中南大学2013年05月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文

2、中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：耋墨啐_日期：—垃生年三月莩日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作

3、者签名：肆导师也年上月孕日Prof'din．I在AGEs诱导的血管重塑中的作用及机制研究摘要目的：大量研究表明AGEs与糖尿病血管病变并发症及动脉粥样硬化有关，肌动蛋白调节蛋白profilin-1介导的肌动蛋白的重组和再分布是内皮细胞收缩、血管通透性升高的主要病理基础。已有研究报道在冠心病患者动脉粥样斑块中profilin．1的表达增加，但其是否参与糖尿病大血管病变未见相关报道。本课题拟探讨糖尿病(diabetesmellitus，DM)合并冠心病(coronaryheartdisease，CHD)患者血浆中profilin-1及糖基化终产物受体(receptorforadvancedg

4、lycationend—products，RAGE)的水平及与冠脉狭窄程度的相关性研究；并进～步在外源性晚期糖基化终产物(advancedglycationendproducts，AGEs)诱导大鼠血管病变模型和体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(RatsarotalSmoothmusclecell)，深入探讨profilin一1在AGEs诱导血管重塑中的作用及相关通路，为寻找新的抗血管病变发生的作用靶点提供理论依据。方法：1．选取31例冠心病患者及31例糖尿病合并冠心病患者和27例健康者，在其知情同意的情况下，收集血标本，采用Elisa试剂盒检测profilin．1、RAGE的血浆水平

5、。2．采用SD大鼠尾静脉注射AGEs．BSA(25mglkg，iMqd，连续2月)诱导血管损伤模型，采用HE染色、Mallory染色、免疫组化(Immunohistochemistry，IHC)检测组织形态学变化及相关指标的改变，采用Westernblot及realtime．PCR检测主动脉profilin．1的表达。3．在体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞，采用不同浓度的外源性AGEs处理不同时间，采用MTT法检测平滑肌的增殖，Westernblot、realtime．PCR检测profilin-l及JNK、STAT3的表达情况。结果：1．与正常对照组比较，CHD组及CHD合并DM组血浆P

6、rofilin-1及RAGE水平明显升高，线性回归显示：冠脉狭窄程度与血浆profilin-1水平及血浆RAGE水平正相关，且血浆profilin-1水平及RAGE水平呈正相关。2．与正常对照组相比，AGEs大鼠HE染色显示主动脉有明显的形态学改变，血管重塑指标IMT／LD、MA／LA、平滑肌层数均有明显增加，IHC蛋白定量显示各组织qbprofilin-1的平均光密度值(Averageopticaldensity，AOD)及表达面积率、积分光密度值(Integralopticaldensity，IOD)明显增加，Westernblot及realtime．PCR,显示主动脉profiin

7、．1表达增加。3．在体外培养的主动脉平滑肌细胞，结果显示随着AGEs浓度的增加其先增殖后受到抑制；在相同药物浓度处理下，随着处理时间的延长其先增殖后受到抑制。Westernblot及realtime．PCR结果显示，其基因表达情况与蛋白表达情况一致，相关通路结果显示profilin．1呈sTAT3依赖性调节，而卧Ⅸ则表达降低，其相关通路的抑制试验由于时间限制尚未完成。结论：1．血浆Profilin．1水平与RAGE水平呈正相关，且二