儿茶酚胺类药物对内毒素诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特,男lJJjrl以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论

2、文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。．作者繇辛卜导师签名擞吼巫年且瑚儿茶酚胺类药物对内毒素诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究摘要：目的：通过观察不同浓度儿茶酚胺(catecholamines，CA)类药物对内毒素(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(Humanumbilicalveinendothelialcells，HⅣEC)活性、细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF

3、．Oc)含量以及血管内皮钙黏蛋白(Ⅶ．Cadherin)表达的影响，从而探讨不同浓度CA类药物在LPS诱导的HUVEC中作用。方法：1)取健康产妇自愿捐赠足月妊娠分娩的新生儿脐带，长约25．30cm，分离HUVEC，培养，传代，冻存，第3代的细胞用于实验；2)以LPS诱导的HUVEC为研究对象，通过噻唑蓝(Methylthiazolyldiphenyl．tetrazoliu，MTT)实验方法检测不同浓度的CA类药物对M舰C活性变化情况；3)以LPS诱导的HUVEC为研究对象，运用酶联免疫分析法(Enz

4、yme．LinkedlmmunoSorbentAssay，ELISA)检测不同浓度CA类药物对HUVEC内细胞上清液中TNF．0【含量变化；4)以LPS诱导的HUVEC为研究对象，运用蛋白质印记(WesternBlot)方法检测不同浓度CA类药物对HUVEC内VE．Cadherin的表达。结果：1．LPS刺激HUVEC后，细胞活性降低，且呈浓度时间依赖趋势；2．正常情况下，多巴胺(DA)(1．10pM)或去甲肾上腺素(YE)／肾上腺素(E)(O．1．1pM)对HUVEC活性无明显影响俨>O．05)，但

5、随着CA药物浓度增加(DA>100I_tM；NE、E>10ktM)，细胞活性显著降低，细胞上清液中TNF．0c含量增加，Ⅶ．Cadherin的表达减少。3．LPS诱导下，DA(1．100I_tM)和NE、E(O．1．109M)能拮抗LPS对细胞的损害作用，但随着药物浓度增加(DA>1009M；NE、E>10I．tM)，HUVEC活性显著降低，细胞上清液中TNF．仅含量增加，VE．Cad_herin的表达减少。结论：1．进一步证实了LPS对HUVEC的活性有抑制作用；2．CA类药物(DA：1．100山或

6、NE／E：O．1．10州)对LPS诱导的HUVEC起保护作用；3．CA类药物(DA：1．100gM或NE／E：O．1．10州)可能通过降低细胞上清液中TNF．0【含量、上调VE．cadherin的表达拮抗LPS致HUVEC的损伤，对细胞产生保护作用；3．CA类药物(DA>100pM或NE／E>10⋯M)对HUVEC产生药物毒性作用。图27幅，表17个，参考文献52篇关键词：脓毒症；内皮细胞；脂多糖；多巴胺；去甲肾上腺素；肾上腺素分类号：R631+3IIITheResearchofprotectivee

7、ffectofcatecholaminesonLPS—inducedhumanumbilicalveinendothelialcellsinjuryAbstract：Purpose：ByobservetheinfluenceofdifferentconcentrationscatecholaminesontheactivityofLPS．inducedHUvEC．thecontentoftheeellsupematantTNF-0【andtheexpressionofVE-cadherin，toelu

8、cidatetheeffectofcatecholaminesonLPSinducedHUVEC．Methods：1)Selectthevoluntarilydonnedumbilicalcordofnewborninfantoffull—termpregnancyfromhealthymothers，about25-30cm；isolatehumanumbilicalveinendothelialcells，thencultivatethemtogen