四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响

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1、目录㈣帆帆帆呲吣帅嗵眦磐Y2337333中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7日lj吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17附表⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．20讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28综述中药复方影响心肌细胞凋亡的研究现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38中文摘要四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响摘要目的：研究四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧损伤后原代培养乳鼠心肌细

3、胞的影响，探讨四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧损伤后原代培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法：本研究应用醇沉技术制备四妙勇安汤合生脉饮的药液，采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法分离SD乳鼠心肌细胞，采取两次差速贴壁法对心肌细胞进行纯化，原代培养，建立细胞模型，倒置相差显微镜下观察原代培养的心肌细胞，不同时间下对细胞形态拍照并录像，利用免疫细胞化学方法对心肌细胞进行纯度鉴定。利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧／复氧模型，制备细胞缺氧用的密闭方盒，自制缺氧盒有进气口和出气口，先用注射器自出气口尽量抽真空，再自进气口向缺氧盒中充高纯氮气30—40min，置换盒中的氧气，关闭缺氧盒的进气口与出气口，缺

4、氧时间4h，复氧时间2h。原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为三组。正常对照组(controlgroup)：不进行缺氧／复氧的处理，不更换培养液，也不加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预；模型组(modelgroup)：进行缺氧／复氧的处理，更换无糖无血清培养液，但不加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液；药物干预组(treatmentgroup)：进行缺氧／复氧的处理，更换无糖无血清培养液，加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预。实验开始时正常对照组更换完全培养基入培养箱培养6h；模型组、药物干预组更换无糖无血清培养液，缺氧培养4h，随后模型组更换完全培养基，药物干预组更换含有10％四妙勇安

5、汤合生脉饮醇沉药液的完全培养基，复氧2h，根据不同实验目的用于实验。采用MTT比色法检测心肌细胞存活力，采用全自动生化自动仪检测心肌细胞培养液AST的含量，采用流式细胞术AnnexinV-FITC／PI双染法检测心肌细胞凋亡率，比较各组心肌细胞存活力、AST含量、心肌细胞凋亡率的情况，从而得出四妙勇安汤合生脉饮对心肌细胞凋亡的影响结果。结果：(1、)原代培养的乳鼠心肌细胞在倒置相差显微镜下观察，接种时心肌呈悬浮状态，最早在6小时内观察到心肌细胞贴壁并搏动，心肌细胞中文摘要逐渐伸展为三角状、梭形状、菱形状、多角形状等多种不规则形状，24小时内大部分心肌细胞搏动，但搏动频率不同，48小

6、时后见心肌细胞相互连接，搏动频率趋于一致，第5天见心肌细胞铺展成片搏动频率基本一致，应用免疫组织化学的方法经鉴定为心肌细胞。(2)四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠一tl,肌细胞凋亡的影响：@MTT比色法检测心肌细胞存活力：正常对照组OD值为(0．274+0．012)，模型组OD值为(O．1894-0．020)，药物干预组OD值为(0．223-0．018)。模型组与正常对照组比较，OD值明显降低，说明模型组心肌细胞活细胞的数量明显减少，药物干预组与正常对照组比较，OD值也降低，药物干预组与模型组比较，OD值增高，说明药物干预组能提高各孔的OD值，心肌细胞活细胞数量虽然较正常对照组减少，但

7、是较模型组并未减少。经单因素方差分析，模型组、药物干预组与正常对照组比较差异具有显著性fP