rhoa在洛伐他汀抑制hepg2细胞增殖中的作用

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1、RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖中的作用作者：吴宝安，梁力建，李威，宋香茹【关键词】羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂；HepG2细胞；增殖；RhoA［摘要］目的：探讨RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖过程中所起的作用。方法：用基因芯片、RT_PCR和Westernblot检测洛伐他汀作用前、后HepG2细胞中RhoA的表达。结果：加入洛伐他汀后，mRNA(RhoA)和RhoA蛋白水平均上调；加入香叶基香叶基焦磷酸或法呢基焦磷酸后，RhoA蛋白水平上调被不同程度逆转。结论：减少RhoA香叶酯化，抑制RhoA的细

2、胞膜锚着可能是洛伐他汀抑制HepG2增殖的机制之一。　　［关键词］羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂；HepG2细胞；增殖；RhoA　　［Abstract］Objective:TostudytheroleofRhoAinlovastatin_inhibitedproliferationofHepG2cells.Methods:ThecDNAmicroarrayassay,RT_PCRandWesternblotwerecarriedtoanalyzethemRNAandproteinexpressionofRhoA,resp

3、ectively.11Results:ThemRNAandproteinexpressionlevelsofRhoAwereup_regulatedinlovastatin_inhibitedHepG2cells.Thisresponsecouldbereversedbyadditionofgeranylgeranylpyrophosphateorfarnesylpyrophosphateindifferentdegrees.Conclusion:RhoAisoprenylationinhibitionanditsdel

4、ocalizationfromthecellmembranemaybeoneofthemechanismsoflovastatin_inhibitedanti_proliferationeffectinHepG2cells.　　［KeyWords］3_hydroxy_3_methylglutarylcoenzymeAreductaseinhibitor;HepG2cell;proliferation;RhoA　　羟甲基戊二酰辅酶A(HMG_CoA)还原酶抑制剂通称他汀类药物(statins)，广泛用于高脂血症的治疗。近年

5、来statins的抗肿瘤作用日益受到重视。洛伐他汀有诱导头颈部鳞癌、甲状腺癌细胞凋亡的作用［1，2］。口服普伐他汀能延长晚期肝细胞癌患者中位生存期［3］。我们发现，洛伐他汀对人肝癌细胞系HepG2细胞的增殖有抑制作用。RhoA(Ras相似物成员A，Rashomologgenefamily，memberA)属Rho家族蛋白的Rho亚家族成员，可通过多种信号途径参与调节细胞的生长、凋亡和细胞周期［4］。本研究旨在探讨RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖过程中的作用。　　1材料与方法11　　11主要试剂、仪器　　HepG2

6、细胞系由中山大学附属第一医院外科实验室保存。洛伐他汀、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)和法呢基焦磷酸(FPP)购自美国ALEXIS公司；DMEM培养基(GibcoBRL公司，美国)；胎牛血清（杭州四季青公司，中国）；TRIzol、SuperScriptTMⅡRNaseH-ReverseTranscriptase(Invitrogen公司，美国)；RNeasyKit、QIAquickNucleotideRemovalKit(QIAGEN公司，德国)；Cy5、Cy3（Amersham公司，英国）；5K基因表达谱cDNA芯片(上

7、海生物芯片公司，中国)；ReverTraAce_α_TM(TOYOBO公司，日本)；鼠抗人RhoA抗体(SantaCruz公司，美国，南方医院李湘博士惠赠)；鼠抗人β_actin（武汉博士德公司，中国）；ECL化学发光液（PIRECE公司，美国）。DU800核酸/蛋白分析仪（BECKMAN公司，美国）；PCR仪(AppliedBiosystems公司，新加坡)；酶标仪，UVP杂交炉（Thermo公司，美国）；扫描仪(Agilent公司，美国)；凝胶成像分析系统，SYnGENE化学发光、荧光检测数字成像系统(Synopti

8、cs公司，英国)；POWERPacHcTM组合式电泳系统(Bio_Rad公司，美国)。　　12方法　　121细胞培养11　　洛伐他汀的活化参照Jakobisiak等［5］的方法稍加改进。HepG2细胞在含体积分数10%胎牛血清的DMEM，37℃，体积分数5%　CO2，饱和湿度贴壁培养，70%融合时换用无血清DMEM，