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时间:2018-08-01
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1、RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖中的作用作者:吴宝安,梁力建,李威,宋香茹【关键词】羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂;HepG2细胞;增殖;RhoA[摘要]目的:探讨RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖过程中所起的作用。方法:用基因芯片、RT_PCR和Westernblot检测洛伐他汀作用前、后HepG2细胞中RhoA的表达。结果:加入洛伐他汀后,mRNA(RhoA)和RhoA蛋白水平均上调;加入香叶基香叶基焦磷酸或法呢基焦磷酸后,RhoA蛋白水平上调被不同程度逆转。结论:减少RhoA香叶酯化,抑制RhoA的细
2、胞膜锚着可能是洛伐他汀抑制HepG2增殖的机制之一。 [关键词]羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂;HepG2细胞;增殖;RhoA [Abstract]Objective:TostudytheroleofRhoAinlovastatin_inhibitedproliferationofHepG2cells.Methods:ThecDNAmicroarrayassay,RT_PCRandWesternblotwerecarriedtoanalyzethemRNAandproteinexpressionofRhoA,resp
3、ectively.11Results:ThemRNAandproteinexpressionlevelsofRhoAwereup_regulatedinlovastatin_inhibitedHepG2cells.Thisresponsecouldbereversedbyadditionofgeranylgeranylpyrophosphateorfarnesylpyrophosphateindifferentdegrees.Conclusion:RhoAisoprenylationinhibitionanditsdel
4、ocalizationfromthecellmembranemaybeoneofthemechanismsoflovastatin_inhibitedanti_proliferationeffectinHepG2cells. [KeyWords]3_hydroxy_3_methylglutarylcoenzymeAreductaseinhibitor;HepG2cell;proliferation;RhoA 羟甲基戊二酰辅酶A(HMG_CoA)还原酶抑制剂通称他汀类药物(statins),广泛用于高脂血症的治疗。近年
5、来statins的抗肿瘤作用日益受到重视。洛伐他汀有诱导头颈部鳞癌、甲状腺癌细胞凋亡的作用[1,2]。口服普伐他汀能延长晚期肝细胞癌患者中位生存期[3]。我们发现,洛伐他汀对人肝癌细胞系HepG2细胞的增殖有抑制作用。RhoA(Ras相似物成员A,Rashomologgenefamily,memberA)属Rho家族蛋白的Rho亚家族成员,可通过多种信号途径参与调节细胞的生长、凋亡和细胞周期[4]。本研究旨在探讨RhoA在洛伐他汀抑制HepG2细胞增殖过程中的作用。 1材料与方法11 11主要试剂、仪器 HepG2
6、细胞系由中山大学附属第一医院外科实验室保存。洛伐他汀、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)和法呢基焦磷酸(FPP)购自美国ALEXIS公司;DMEM培养基(GibcoBRL公司,美国);胎牛血清(杭州四季青公司,中国);TRIzol、SuperScriptTMⅡRNaseH-ReverseTranscriptase(Invitrogen公司,美国);RNeasyKit、QIAquickNucleotideRemovalKit(QIAGEN公司,德国);Cy5、Cy3(Amersham公司,英国);5K基因表达谱cDNA芯片(上
7、海生物芯片公司,中国);ReverTraAce_α_TM(TOYOBO公司,日本);鼠抗人RhoA抗体(SantaCruz公司,美国,南方医院李湘博士惠赠);鼠抗人β_actin(武汉博士德公司,中国);ECL化学发光液(PIRECE公司,美国)。DU800核酸/蛋白分析仪(BECKMAN公司,美国);PCR仪(AppliedBiosystems公司,新加坡);酶标仪,UVP杂交炉(Thermo公司,美国);扫描仪(Agilent公司,美国);凝胶成像分析系统,SYnGENE化学发光、荧光检测数字成像系统(Synopti
8、cs公司,英国);POWERPacHcTM组合式电泳系统(Bio_Rad公司,美国)。 12方法 121细胞培养11 洛伐他汀的活化参照Jakobisiak等[5]的方法稍加改进。HepG2细胞在含体积分数10%胎牛血清的DMEM,37℃,体积分数5% CO2,饱和湿度贴壁培养,70%融合时换用无血清DMEM,
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