复方木鸡冲剂抑制hepg2细胞增殖及诱导分化的作用.doc

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1、复方木鸡冲剂抑制HepG2细胞增殖及诱导分化的作用【摘要】目的：探究复方木鸡冲剂在体外对人肝癌细胞株HepG2的抗增殖作用及其机制。方法：光镜观察细胞形态的变化。MTT法检测木鸡冲剂对肿瘤细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。全自动生化分析仪检测培养上清液中GGT、ALP浓度的变化；免疫细胞化学法检测细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子P21WAF1的表迗。结果：复方木鸡冲剂对HepG2有明显的抑制生长作用，细胞凋亡率明显增高，培养上清中ALP浓度升高，AFP浓度降低，P21WAF1表达呈强阳性，而

2、GGT没有明显变化。结论：复方木鸡冲剂明显抑制HepG2细胞的生长，其抗肿瘤的机制与诱导肿瘤细胞凋亡和促分化有关。【关键词】复方木鸡冲剂肝细胞癌凋亡分化StudyoninhibitionproliferationanddifferentiationjectTostudytheinhihanismofMujiChongjcelllineHepG2.Methtedtodescribetheprnomacells.Apoptosigjiwasinvestigated【Abstract】Obbitioneffec

3、tandmecionhepatocarcinomaodsMTTassaywasadopoliferationofcareisinducedbyMujiChonbyapplyinglightmicmetry(FCM),ThecontroscopyandflowcytoentsofV-glutamyltranspeptidase(V-GT)tase(ALP)inthesupenedbybiochemistrytotEin(AFP)wasdetecsay.Immunohistocheandalkalinepho

4、spharnatantweredetermiechniques,a-fetoprtedbyradioimmunoasmicalstainingwasperformedtodeterminetheprotEInofp21WAF1.Results:OurresultsshowedMujiChongjireducedHepG2cellviabilityobviously(p【Keywords】MujiChongji；HepG2cellline；apoptosis；differentiation原发性肝癌是最常见

5、的恶性肿瘤，死亡率很高。在发展中国家发病率占全球肝癌病例80%以上而我国发生的肝癌占全世界发病率的％［1］。目前肝癌的药物治疗中是以化学药品为主，但化学药品的开发费用昂贵，毒副作用大，多有不同程度的致突变毒性。因此，人们把目光转向中药，试图从天然成分中寻找毒副作用小。作用独特的抗肿瘤药物。复方木鸡冲剂［2-3］是我国传统的珍贵药材，具有抑制甲胎蛋白升高和调节免疫功能的作用，已用于临床治疗肝硬化、肝炎等肝脏疾病，但对该药抗肿瘤作用机制的研究很少，本实验通过复方木鸡冲剂对人肝癌细胞系HepG2作用的系列分析及

6、与细胞凋亡和分化的关系。探讨该药的抗肿瘤效应，为中药在肿瘤治疗中的应用提供参考。1材料细胞株人肝母细胞瘤HepG2细胞由大连医科大学病理生理教研室冻存保种。细胞接种于含10°%FBS的DMEM全培养基中，在37°C,5°/oCO2饱和湿度孵箱中孵育，2〜3天传代一次，待细胞铺满瓶底的80°/。〜90°/。时进行传代。传代时用胰蛋白酶进行消化，使细胞与瓶壁脱离，加全培基终止消化，制成单个细胞悬液，取对数生长期细胞用于实验。主要试剂和仪器L-DMEM（GIBC0U公司），胎牛血清，Caspase3、Bcl-2

7、、P21WAF1单抗（北京中杉金桥生物技术有限公司），复方木鸡冲剂，榄香烯，MTT,AnnexinV/PI,流式细胞仪（FACSCalibur,BD公司），全自动酶标仪。2方法MTT法检测HepG2细胞增殖活性取对数生长期的细胞，用％胰蛋白酶消化后，离心lOOOrpm，5min,弃上清，加入含10%FBS的DMEM培养液制备成浓度为1X105/ml的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔lOOul。实验设空白对照组，阳性药物对照组及木鸡冲剂组，每组设4个平行孔，于37°C,5%C02条件下分别培养24h、4

8、8h、72h后，每孔加15ulMTT液，避光继续培养4h后离心，弃上清，加DMS0150ul/孔，在自动酶标仪上以570nm波长测定各孔0D值，计算药物对肿瘤细胞的生长抑制率：抑制率=（1-实验组平均0D值/空白对照组平均0D值）X100%细胞形态学观察取复方木鸡冲剂作用24h、48h和72h后的HepG2细胞涂片，自然凉干，瑞氏-姬姆萨染色，显微镜下观察细胞的形态，常规培养细胞作空白对照。流式细胞仪（AnnexinV/PI双