ECHS1在HepG2细胞中促增殖与抗凋亡的作用

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。、一学位论文作者签名(手写)：4小≥签字日期：C尹‘车3‘月刃日，、J、一学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分

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3、疗提供新的理论依据。方法：构建ECHSl基因的干扰质粒，转染HepG2细胞并通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1的细胞株；RealtimePCR和Westernblot方法检测其干扰效率；CCK．8(CellCountingKit．8)和BrdU(5一Bromo．2’-deoxyuridine)方法检测ECHS1干扰后HepG2细胞的增殖情况；流式细胞仪及TUNEL技术分析ECHSl基因干扰后对HepG2细胞凋亡的影响；Westernblot方法检测增殖及凋亡相关通路蛋白表达水平，如ERK、P-ERK、CyclinD1、CyclinD3、Akt、P-Akt、GSK一3p、Bax、Bcl．xl。结

4、果：成功构建ECHSl的干扰质粒；RealtimePCR和Westernblot方法显示实验组(成功转染pGPU6／GFP／siRNA-ECHSl)HepG2细胞中ECHSl表达水平明显低于空白对照组(未转染质粒的HepG2细胞)和阴性对照组(转染空载体pU6的HepG2细胞)(P<0．05)；与阴性对照组比较，CCK．8和BrdU方法表明实验组HepG2细胞的增殖能力明显受到抑制(尸

5、98+1．07)％，阴性对照组的凋亡率为(10．55士0．19)％，两者差异有统计学意义(P

6、ive：Toobservetheeffectoftheenoyl—CoAhydrataseshortchain1(ECHS1)onproliferationandapoptosisinHepG2cells，inordertoprovideanewtheoreticalbasisofgenetherapyanddiagnosistohepatocellularcarcinoma．Methods：TheconstructedplasmidpGpU6／GFP／siRNA-ECHS1forECHS1geneinterferenceWastransfectedintoHepG2cells．TheHepG

7、2cells、析t11stableECHS1geneinterferencewerescreenedbypuromycin．TheexpressionlevelofECHS1inHepG2cellsWasdetectedbyRealtimePCRandWesternblot．TheproliferativeabilityofHepG2cellsaftertransfectionwithpGpU6／