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时间:2019-03-03
《pxr在偽鳞癌细胞中的抗凋亡作用研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheAntiapoptoticRoleofPregnaneXReceptorinHumanesophagealsquamousCancerousCellsBy:JinghuaXieSupervisor:Prof.QingxiaFanOncologyTheFirstClinicalMedicineofZhengzhouUniversityMay2013原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经
2、注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:日期:年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成
3、果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:日期:年月日中文摘要PXR在食管鳞癌细胞中的抗凋亡作用研究硕士研究生:谢晶华导师:樊青霞教授郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052摘要背景食管癌是我国最常见的恶性消化道肿瘤之一。它的校正死亡率达20.4/10万,居世界第六位。鳞状细胞癌是食管癌的主要病理类型,占全部食管癌的95%左右。虽然近年来其诊断和综合治疗状况有很大进展,但5年生存率仍在15%一24%左右,并未得到根本性的改善。导致食管癌治疗失败的主要原因是肿瘤的复发和耐药。孕烷X受体(PxR)是配体活化的转录因子j是核受体家族重要成员之一。其主要生
4、物学功能是参与机体对内源及外源化合物的代谢、排泄过程,是核受体家族重要成员之一。PXR可以抑制炎症,在促进或抑制某些肿瘤细胞增殖中起重要作用,参与肿瘤多药耐药形成的机制,大量研究表明PXR参与调控肿瘤细胞的凋亡也可能是其诱导耐药的机制之一。目的本研究通过检测孕烷X受体在食管癌EC9706细胞中的表达,拟使用利福平活化食管鳞癌EC9706细胞中的PXR受体,阿霉素诱导高表达PXR受体的EC9706细胞凋亡,比较高表达PXR受体的EC9706细胞与正常表达PXR受体的EC9706细胞凋亡率以及抗凋亡蛋白Caspase.3、Bcl.xL的表达差异,探索孕烷X受体抗食管鳞癌细胞凋亡中的作用。中文摘
5、要方法1.采用利福平活化食管鳞癌EC9706细胞中的PXR受体,建立表达PXR的食管鳞癌可传代细胞系。2.应用流式细胞仪、四氮唑蓝比色法(MTT法)、RT-PCR等方法测定表达PXR的食管鳞癌可传代细胞系的建立是否成功。3.用阿霉素诱导野生型PXR食管鳞癌细胞系和表达PXR的食管鳞癌可传代细胞系凋亡。4.应用MTT法、Western.Blot、免疫组化法研究阿霉素对两种类型的人EC9706增殖情况的影响,探索孕烷x受体抗EC9706凋亡中的作用。结果1.MTT检测结果显示:利福平对EC9706细胞增殖具有激活作用。RIF组与对照组相比,有显著性差异(p6、放大4000~15000倍的透射电镜下观察,正常EC9706细胞胞膜完整,在表面有大量绒毛样突起。细胞核大、形状不规则,核仁明显变大,内染色质均匀分散,密度一致,细胞质内细胞器丰富。RIF组的EC9706细胞呈现不同程度凋亡性改变:首先会出现细胞体积逐渐缩小,细胞核的某些地方会向外突起小于90度,细胞核内的染色质会出现高度浓缩,密度会增高,汇集在核膜下,呈现出新月形小体,有的甚至还会出现核固缩和核碎裂,最后出现凋亡小体。3.流式细胞术结果分析显示:阿霉素能使EC9706细胞生长周期受阻并发生凋亡。DMSO组和RIF组的EC9706细胞经阿霉素处理后,用流式细胞仪可测得典型的亚二倍体凋亡峰,7、凋亡百分率分别为4.82%、5.31%。RIF处理组与DMSO对照组相比较均差异显著(p
6、放大4000~15000倍的透射电镜下观察,正常EC9706细胞胞膜完整,在表面有大量绒毛样突起。细胞核大、形状不规则,核仁明显变大,内染色质均匀分散,密度一致,细胞质内细胞器丰富。RIF组的EC9706细胞呈现不同程度凋亡性改变:首先会出现细胞体积逐渐缩小,细胞核的某些地方会向外突起小于90度,细胞核内的染色质会出现高度浓缩,密度会增高,汇集在核膜下,呈现出新月形小体,有的甚至还会出现核固缩和核碎裂,最后出现凋亡小体。3.流式细胞术结果分析显示:阿霉素能使EC9706细胞生长周期受阻并发生凋亡。DMSO组和RIF组的EC9706细胞经阿霉素处理后,用流式细胞仪可测得典型的亚二倍体凋亡峰,
7、凋亡百分率分别为4.82%、5.31%。RIF处理组与DMSO对照组相比较均差异显著(p
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