肿瘤化疗抗性细胞中抗凋亡基因与死亡信号分子的作用研究

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1、华中科技大学硕士学位论文肿瘤化疗抗性细胞中抗凋亡基因与死亡信号分子的作用研究姓名：周杜华申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：张桂梅;冯作化2003.4.1华中科技大学同济医学院硕士学位论文摘要肿癌化疗抗性细胞中抗凋亡基因与死亡信号分子的作用研究目的1分析抗凋亡基因survivin和bcl-2在不同肿瘤细胞株中的表达差异。探讨肿瘤细胞被化疗药物诱导产生的药物抵抗同抗凋亡基因表达变化的相互关系，并分析化疗药物处理前后肿瘤细胞对死亡信号分子TRAIL诱导的细胞凋亡的敏感性变化及相应的抗凋亡基因表达．从而更深入的了解化疗药物引起的残存肿瘤细胞的抗凋亡特性，为评估化疗效

2、果和寻找新的有效杀瘤靶点提供依据。方法l利用经典的RT-PCR方法检测体外培养的肿瘤细胞survivin及b'cl-2表达。利用凝胶成像系统和内对照半定量分析它们的表达变化。利用MTT法测定药物对于药物处理后肿瘤细胞的生长抑制的变化。利用流式细胞仪检测化疗药物处理前后其细胞凋亡指数(AI)的变化。利用脂质体包裹DNA转染BHK细胞。将转染TRAIL的BHK细胞与经过药物处理的MA782细胞混合，检测其survivin及bcl一2表达变化和细胞凋亡指数的变化。jr、．【‘结果l小鼠H22肝癌细胞株未见可检测到的survivin表达，而小鼠14日龄胚肝和小鼠MA782乳腺癌细胞株则

3、可见其显著过表达。三者均可检测到bcl一2的过表达。MA782细胞用盐酸阿霉素(ADM)处理后24小时可见到survivin相对表达水平的上升，并且其表达水平同药物、浓度成正相关。而bcl-2的相对表达水平无显著变化。硼rT法显示盐酸阿霉素处理后的H22细胞和MA782细胞对其产生了一定的耐药性。流华中科技大学同济医学院碗士学位论文式细胞仪检测显示盐酸阿霉素引起了MA782细胞凋亡指数的显著上升。而转染TRAIL的BHK细胞与盐酸阿霉素处理后的MA782细胞混合后肿瘤细胞抗凋亡基因的表达和细胞凋亡指细胞混合的肿瘤细胞相比并无显著差异转染了TRAIL的BHK结论t抗凋亡基因表达在

4、不同肿瘤细胞株中存在差异。盐酸阿霉素(ADM)引起的细胞大量死亡同细胞凋亡相关。其处理后的存活肿瘤细胞对于死亡信号分子诱导的细胞凋亡的敏感性降低。这种降低可能同抗凋亡基因survivin的表达升高有关而与bcl-2无关。关健诃l抗凋亡基因，化疗抗性，细胞凋亡，死亡信号分子TRAIL2华中科技大学同济医学院硕士学位论文ABSTRACTTheResearchfortheFunctionofAnti·apoptosisGeneanddeathsignalmolecularinChemoresistantTumorCellsobjective：Toanalysethedifferenc

5、esofanti·apoptosisgeneexpressionindifferenttunlorcellstrains．Todiscuss也econ-elationbetweenthechemo-resisteneeinducedbydoxombicinandexpressionofanti-apoptosisgeneinthetumorcells．ToanalysethesensitivityoftheHlnlorcellstOapoptosisinducedbythedeathsignalmoleeuler--qT认ILandcorrespondinganti-apopt

6、osisgeneexpressioninthetumorcellsbeforeandafterpreparedwithdrugs．AndSOunderstanddeeplytheanti-apoptosischaracterofthechmmoresistenttumorcellsinordertOevaluatetherapeuticefficacyofanticancerdrugsandsearchneweffectivetargetofkillingtumor．Methods：Todetecttheexpressionofsurvivinandbcl·2withthecl

7、assicRT-PCRmethods．Toanalysetheexpressionchangesemi-quantitativelyincomparedwiththecontrolusingthegelimagingsystem．ToevaluatethegrowarrestrateoftumorcellswithdrugusingMTTmethods．Todetectthechangeofapoptosisindexafterandbeforepreparedwithdrugusingth