自噬在熊果酸抑制血管内皮细胞增殖中的作用

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1、重庆医科大学硕士学位论文自噬在熊果酸抑制血管内皮细胞增殖中的作用姓名：毕娟娟申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：叶秀峰201205重庆医科大学顼士研究生学位论文自噬在熊果酸抑制血管内皮细胞增殖中的作用1摘要目的：研究自噬在熊果酸(Urs01icacid，UA)抑制人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveillendothelialcells，HUVECs)增殖中的作用。方法：体外培养HUVECs，采用不同浓度的熊果酸和自噬特异性抑制剂3．甲基腺嘌呤(3_methyladenille，3一MA，)与熊果酸联合处理。运

2、用MTT法检测熊果酸对HUVECs增殖的抑制作用及其联合3一MA处理细胞后细胞存活状态的变化；在透射电镜下观察熊果酸作用前后HUVECs结构的改变；微管相关蛋白1轻链3(曲crotubule—associatedprotein1lightchain3，LC3)免疫荧光和流式细胞术检测熊果酸对HuVECs自噬水平的影响；单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine，MDC)荧光染色法观察熊果酸对HUVECs自噬泡的影响；Westemblotting检测LC3及自噬相关蛋白Beclin一1蛋白的表达情况；RT-PCR检测LC3及Becl

3、in．1转录水平的变化；流式细胞术检测HUVECs经熊果酸和3一MA与熊果酸联合处理后凋亡率的变化。结果：随着熊果酸作用于HUVECs剂量的增加细胞的生长抑制程度及死亡程度也逐渐的增强；熊果酸抑制HUVECs生长增值36h的半数作用剂量为20岬01／L；HUVECs经熊果酸处理后透射电镜及MDC基金项目：重庆市科技攻关计划项目(cscT’2008AB5118)、重庆市教委科技研究项目基金(KJ08032)重庆医科大学顼士研究生学位论文染色均显示：细胞浆中自噬相关形态的数量具有明显上升的趋势；细胞免疫荧光法检测显示熊果酸处理HUVECs组LC3阳

4、性细胞数较对照组明显增强且流式细胞术检测显示熊果酸处理HUVECs后细胞的荧光强度与正常细胞培养组相比明显增强：HUVECs经熊果酸处理后可上调LC3及Beclin．1的蛋白水平及mRNA的转录水平；3一MA与熊果酸联合作用后，HUVECs受到的增殖抑制明显高于熊果酸单独作用，且其凋亡率上升明显。结论：熊果酸抑制人脐静脉血管内皮细胞生长增殖，在这个过程中自噬现象被激活，自噬在此过程中对HUVECs起保护作用。自噬抑制剂3一MA能够增强熊果酸抑制HUVECs生长增殖的作用并且促进熊果酸诱导HUVECs发生凋亡。关键词：熊果酸；人脐静脉血管内皮细胞

5、；白噬；凋亡RoleofautophagyonUrsolicacid—mediatedsuppressionofDroliferationinvascularendOthelialcells0tDr0ⅡteratlonlnVaSCUIarencIOInenaICelISABSTRACTPu印ose：Urs01icacid(UA)extracted疗omChiIleseherbshasbeenshowenainllibitingr01einpr01iferationofHumanUmbilicalVeinEndothelialCells(HUVE

6、Cs)，butthespeci丘cmechanismsunderlyingthisprocessremainunclear．Int11isstudy，weiIlVestigatedtheroleofautophagyinthesuppressivee虢ctofUAonthepr01iferationofhumanumbilicalVeinendothelialcells(HUVECs)Methods：HUVECswereculturedinvitroandtreatedwithVariousconcentrationsofUAand3一memy

7、ladeIline(Autophagyi11ll曲“or，3．MA)+UArespectively．Theef．fectsofUAonproli佗rationaswellas3．MA+UAonsuⅣivalofHUVECsweredeter面nedbyMTTmethod．ThechangeofultrastmctureinHUVECswasdetectedusingTtansmissionElec仃onMicroscope(TEM)．Theexpressionsofautophagy—associatedproteinsinHUVECstrea

8、tedwithUAweredeteHllinedbyⅡuorescntstaillingof面crotubule—associatedproteinc