熊果酸滴眼液抑制缝线诱导大鼠角膜新生血管的实验研究

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1、南方医科大学2012级硕士学位论文熊果酸滴眼液抑制缝线诱导大鼠角膜新生血管的实验研究ExperimentalStudiesoftheInhibitiveEffectofUrsolicAcidDropsOilCornealNeovascularization课题来源：自选课题学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员曾丽娜陆晓和眼科学学术型硕士研究生第二临床医学院陈剑教授钟敬祥教授邱波教授高前应教授项道满教授2014年3月18日广州硕士学位论文Illllalllllllll

2、llllllllllIllY2618456熊果酸滴眼液抑制缝线诱导大鼠角膜新生血管的实验研究硕士研究生：曾丽娜指导教师：陆晓和教授摘要[研究背景]正常角膜在多种因素共同作用下处于稳定的“免疫赦免”状态，以保持角膜的透明性，使角膜能够发挥正常的生理功能。在某些因素作用下，如配戴角膜接触镜、感染、眼外伤、热烧伤或化学伤、既往手术史、免疫性眼病等可使角膜的“免疫赦免”平衡被打破导致角膜新生血管(cornealneovascularization，CNV)的产生。虽然角膜新生血管对清除感染、促进伤口愈合、抑制角膜溶

3、解等有一定作用，但角膜新生血管可破坏角膜正常微环境，使眼前节相关免疫赦免偏离消失，使角膜失去透明性，严重影响视力甚至导致失明。角膜新生血管的发病机制尚不明确，目前研究发现新生血管的发生与促血管生成因子及抗血管生成因子的失衡、角膜缘血管屏障破坏、缺氧、炎症反应、角膜水肿等多种因素的参与有关。目前对于角膜新生血管的治疗原则主要有抑制血管生成和促进血管退化，具体有：药物治疗如激素、非甾体类抗炎药、血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂等；手术治疗如眼表重建术、电解针烧灼法等；基因治疗如内皮抑素(ES)、色素上皮衍生因

4、子(PEDF)、血管生成抑素(AS)等；其他治疗如激光治疗，光动力学疗法等。随着角膜新生血管发病机制的深入研究，其治疗方法也取得很大的进展，但目前临床上尚无治疗角膜新生血管的理想药物。因此，寻找作用强、中文摘要副作用少、价格经济、更为有效的新生血管抑制剂仍然是角膜新生血管研究的热点。熊果酸(ursolicacid，UA)又名乌苏酸、乌索酸，是一种存在于多种天然植物中的三萜类化合物，具有抗炎、抗菌、抗糖尿病、降低血糖、抗癌、抗促癌等多种生物学效应。近年来对熊果酸的研究发现，它具有抗多种恶性肿瘤血管生成的作用，

5、不但能抑制肿瘤细胞生长，而且还能抑制肿瘤新生血管的形成。熊果酸能够抑制血管生成的作用，主要有：①抑制血管内皮细胞(VEC)的增殖、迁移和管腔形成：②具有抗炎作用，能够抑制环氧化酶II(Cyclooxygenase-2，COX一2)的表达，减轻炎症反应；③降{氐VEGF的表达，从而抑制血管内皮细胞的增殖、移行；④刺激基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase，MMP．2)和尿激酶，达到降解细胞外基质，促进细胞凋亡，抑制新生血管腔形成的目的。VEGF是一种具有生物学效应的血管源性肽，是目前

6、研究最多的血管生成因子之一，是一个强有力的内源性血管生长刺激因子，它能够调节造血干细胞的发育、细胞外基质的转型和炎性因子的产生，是一个特异作用于血管内皮细胞的生长因子，能够直接刺激血管内皮细胞的增生并诱导新生血管的生成。研究证明VEGF参与新生血管生成的多个步骤，是影响新生血管生成最重要的因子之一。基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)是一组活性依赖金属离子锌并以细胞外基质成分为水解底物的结构和功能复杂的蛋白酶家族，主要参与细胞外基质(extracellularmatr

7、ix，ECM)的水解和重构。基质金属蛋白酶．2，又叫明胶酶A，是目前研究最多的MMPs之一，在细胞外基质合成和降解代谢过程中发挥着重要的作用，参与新生血管形成。实验表明，VEGF能够通过多种细胞因子途径作用于血管内皮细胞，刺激细胞外基质的降解，诱导内皮细胞增殖、迁徙、分化和官腔形成作用。体外实验也表明，熊果酸能够抑制血管内皮细胞的迁移，上调尿激酶和MMP一2的表达，抑制内皮细胞的管腔形成。目前熊果酸用于角膜新生血管的研究尚无相关的报道，因此，我们的实验通过观察熊果酸的角膜毒性作用，筛选安全浓度范围内的熊果酸

8、滴眼液，观察硕士学位论文其抑制角膜新生血管的作用及VEGF、MMP．2在角膜新生血管中表达的影响，初步探讨其可能的机制。第一部分熊果酸滴眼液对大鼠角膜毒性作用的实验研究【目的】研究熊果酸滴眼液对大鼠角膜的毒性，寻找熊果酸滴眼液局部使用的安全浓度。【方法】在无菌条件下将熊果酸溶于含有二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)助溶剂的磷酸盐缓冲液(phoSphatebuffers01．ion，PBS)