α-法尼烯合成酶 载体构建 遗传转化 western杂交 丰产梨论文

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1、α-法尼烯合成酶论文：α-法尼烯合成酶基因转化丰产梨的研究【中文摘要】α-法尼烯是一种存在于生物体中的倍半萜类物质,已知与植物的抗冷性、昆虫的诱导及冷藏苹果和梨果实重大生理病害-虎皮病的发生有关,是苹果果实中重要的香气成分之一。α-法尼烯的生物合成是通过类异戊二烯途径中的甲羟戊酸途径,α-法尼烯合成酶是调控α-法尼烯合成的关键酶,催化FPP转变为α-法尼烯。本实验根据Genbank中注册的α-法尼烯合成酶基因全长序列设计特定引物,利用荧光定量PCR和Western杂交的方法,鉴定初步获得转基因植株,并研究了生理特性。主要结果如下:(

2、1)构建了pBI-AFS反义和RNAi表达载体,并转化丰产梨,得到转AFS基因的丰产梨植株。(2)以丰产梨组培苗为材料,优化了丰产梨组培苗的生根及遗传转化体系,并成功将转基因组培苗驯化移栽。最适宜丰产梨继代的培养基为MS+BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L,生根培养基为1/2MS+IBA0.3mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L.(3)转基因植株经过RT-PCR和荧光定量PCR分析表明,野生型中α-法尼烯合成酶基因的相对表达量最高,反义转化植株中有所降低,RN...【英文摘要】α

3、-Farnesene,anacyclicsesquiterpenehydrocarbonthatexistedinorganisms,hasbeenprovedtoplayanimportantroleinattractionofcodlingmothchillinginjuryanddevelopmentofscaldoncold-storageapples.Asoneofaromarelatedvolatilesinapplefruit,α-farneseneappearstobepredominantlythroughclas

4、sicalmevalonatepathway.α-farnesenesynthase(AFS)isthefinal,rate-limitingenzymethatconvertsfarnesyldiphosphate(FPP)toα-farneseneinthemevalonicacid(MVA)pathwayofterpenebiosynt...【关键词】α-法尼烯合成酶载体构建遗传转化western杂交丰产梨【英文关键词】α-farnesenesynthaseVectorconstructiongenetictansformat

5、ionWesternblot‘Fertility’pear【目录】α-法尼烯合成酶基因转化丰产梨的研究中文摘要8-9英文摘要91前言10-251.1虎皮病与α-法尼烯10-141.1.1虎皮病的研究进展10-111.1.2α-法尼烯的代谢途径11-141.2虎皮病的防治14-161.3RNA干扰16-201.3.1RNAi的产生和发展16-171.3.2RNAi与其他基因表达抑制技术的比较171.3.3RNAi的作用机制17-181.3.4RNAi表达载体的构建设计原则18-191.3.5RNAi技术的应用19-201.4反义RNA

6、技术20-221.4.1反义RNA技术的原理及作用机制20-211.4.2反义RNA技术在植物上的应用21-221.5实时荧光定量PCR技术22-251.5.1实时荧光定量PCR技术原理221.5.2实时荧光定量PCR技术22-231.5.3实时荧光定量PCR研究进展23-252材料与方法25-442.1实验材料252.1.1植物材料252.1.2菌株与质粒252.1.3酶及生化试剂252.1.4PCR引物252.2实验方法25-442.2.1植物表达载体的构建25-272.2.2RNAi表达载体PBI-L-S的构建27-312.2

7、.3反义表达载体PBI-L的构建31-322.2.4Trizol法提取苹果总RNA32-332.2.5RNA反转录332.2.6PCR检测转基因植株33-352.2.7转基因植株表达量分析35-362.2.8转基因植株的Western检测36-412.2.9转基因丰产梨组培苗的驯化移栽41-422.2.10转基因丰产梨抗高温指标测定42-432.2.11叶片中挥发物的测定43-443结果与分析44-533.1植物表达载体的构建44-453.1.1RNAi表达载体PBI-L-S的构建443.1.2反义表达载体PBI-L的构建44-45

8、3.2遗传转化453.3转基因植株的检测及基因的表达分析45-493.3.1AFS基因转化丰产梨及转基因植株的PCR检测45-463.3.2转基因植株的表达分析46-473.3.3转基因植株Western的检测47-483.3.4不同