膀胱癌中blu基因启动子高甲基化和转录水平论文

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1、膀胱癌中BLU基因启动子高甲基化和转录水平论文张剑英，李智，于永春，段建敏【摘要】目的研究膀胱癌中BLU基因启动子甲基化状态、转录水平及其意义。方法采用甲基化特异性PCR(methylationspecificPCR,MSP)技术和逆转录PCR(RTPCR)技术分别检测54例膀胱癌患者癌组织及45例相应癌周正常组织、3例非肿瘤患者的正常膀胱组织中BLU基因启动子甲基化状态和转录水平。结果①31.5%(17/54)膀胱癌组织中BLU基因高甲基化，相应癌周正常组织和3例正常膀胱组织均未发现该基因高甲基化改变；

2、②甲基化状态与膀胱癌临床病理参数无明显相关性；③在45例膀胱癌组织中，BLU表达缺失率为42.2%(19/45)；④BLUmRNA表达缺失与肿瘤临床分期和病理分级相关(P0.05)；⑤在启动子高甲基化的膀胱癌中，92.3%(12/13)BLUmRNA表达异常下调或缺失。结论膀胱癌中频繁发生BLU基因的高甲基化和mRNA表达缺失，其高甲基化可能是基因转录失活的重要原因。【关键词】膀胱癌；BLU；甲基化；转录；甲基化特异性PCRPromoterhypermethylationandtranscriptionle

3、velofBLUinbladdercancerABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethepromotermethylationstatusandthetranscriptionlevelofBLUinbladdercarcinomaandtheirsignificance.MethodsThemethylationstatusofpromoterandthetranscriptionlevelofBLUinedbymethylationspecificPCR(MSP)andRTP

4、CRinbladdercancertissuesfrom54patients,adjacentnormaltissuesfrom45casesandnormalbladdertissuesfrom3noncancerouspatients.Results①31.5%(17/54)bladdercancertissuesshoethylation;neitherthepairedadjacentnormaltissuesnorthethreenormalbladdertissuesshoethylation.

5、②Thereethylationstatusandtheclinicalpathologicalparametersinbladdercancer.③TheexpressionofBLUafromcystectomy.④LossofBLUexpressionor(P0.05).⑤TheexpressionofBLUmRNAallydoatissuesoterhypermethylation.ConclusionBLUethylatedandabsentofmRNAexpressioninbladdercar

6、cinoma.HypermethylationofBLUmaycontributetoitstranscriptioninactivation.KEYSP)肿瘤抑制基因启动子区CpG岛的高甲基化已被确立为基因转录失活的一种重要机制1。膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,近年来的研究发现.freelicDNAPurificationKit(Promega公司)从组织中抽提DNA，紫外分光光度仪定量。1.3组织RNA的抽提严格按照TRIzol(Invitrogen公司)试剂盒说明书提取组织总RNA，并根据A260

7、值计算出RNA浓度，以A260/A280值判定其纯度，利用DnaseⅠ去除含有的痕量DNA。1.4DNA的亚硫酸氢盐修饰和甲基化特异性PCR(MSP)采用基因组DNA修饰试剂盒CpGenomeDNAModificationKit(Serelogical公司)，取1μgDNA按说明书操作步骤进行修饰。以修饰后DNA作为模板,分别利用甲基化和非甲基化特异性引物进行热启动PCR扩增。甲基化特异性引物为5′TTCGTGGGTTATAGTTCGAGAAAGCG3′(上游)和5′AACGAATTAACCGCGCC

8、TACGC3′(下游)；非甲基化特异性引物为5′TTTGTGGGTTATAGTTTGAGAAAGTG3′(上游)和5′AACAAATTAACCACACCTACAC3′(下游)。反应条件按降落(touchdoin；按94℃20s，72-67℃(甲基化引物)/66-61℃(未甲基化引物)40s(每个循环退火温度依次降低1℃)，72℃20s进行6个循环，再按94℃20s，66℃(甲基化引物)/60℃(未甲基化引