膀胱癌和肾癌中rassf1a和blu的甲基化状态

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1、膀胱癌和肾癌中RASSF1A和BLU的甲基化状态【关键词】膀胱癌肾癌RASSF1ABLU高甲基化　　【Abstract】ObjectivesToinvestigatethepromotermethylationstatusofRASSF1AandBLUinbladdercarcinomaandrenalcarcinomaandtheirsignificance.MethodsThemethylationstatusofpromoterofRASSF1AandBLUinedbyMSPin54casesofbladdercarcinomatissuesandadjacen

2、tnormaltissuesfrom45cases,12casesofrenalcarcinomatissuesandadjacentnormaltissuesand3casesofnormalbladdertissuesfromnoncancerouspatients.ResultsHypermethylationofRASSF1AandBLUatissues,retrospectively.Inrenalcarcinomatissues,hypermethylationofRASSF1AandBLUethylationstatusofRASSF1AandBLUet

3、ersofbladdercarcinomaethylationstatusofRASSF1AandBLUinbladdercarcinomaorrenalcarcinoma(P>0.05).ConclusionsRASSF1AandBLUarefoundethylationinbladdercarcinomaandrenalcarcinoma，aybeinvolvedintumorigenesis.　　【KeySP技术　　采用基因组DNA修饰试剂盒CpGenomeDNAModificationKit(Serelogical公司)，取1μgDNA按说明书操作步骤进

4、行修饰。以修饰后DNA作为模板,分别利用甲基化和非甲基化特异性引物进行热启动PCR扩增(引物序列及扩增条件见表1)，所有引物均由上海生工生物工程有限公司合成。取10μl扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,GIS凝胶图像处理系统分析结果。表1MSP引物序列及扩增条件（略）注：MF代表甲基化特异性上游引物；MR代表甲基化特异性下游引物；UF代表未甲基化特异性上游引物；UR代表未甲基化特异性下游引物　　1.4PCR产物克隆和测序　　随机挑选甲基化和未甲基化的4份PCR产物，TA克隆后进行测序，测序引物为M13通用引物，测序仪为ABI377型测序仪。　　1.5统计学分析　　采用SPS

5、S11.0统计软件包处理数据，进行χ2检验或四格表精确检验。以P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1甲基化状态检测　　　　45例膀胱癌组织中，RASSF1A和BLU甲基化率分别为57.8%(26/45)和28.9%(13/45)；12例肾癌组织中，甲基化率分别为66.7%(8/12)和33.3%(4/12)；1例膀胱癌癌周正常组织发现RASSF1A启动子高甲基化，其余所有癌周正常组织和正常膀胱组织均未发现基因异常甲基化。两基因启动子高甲基化与膀胱癌患者临床病理特征的相关性见表2。膀胱癌或肾癌中，两基因甲基化之间均无明显相关性(P>0.05)，

6、见图1。表2膀胱癌组织RASSF1A和BLU基因甲基化与临床病理特征之间的关系（略）　　2.2克隆测序结果见图2。　　3讨论　　RASSF1A是RASSF1最常见的转录之一，cDNA全长1873bp，编码含340个氨基酸的蛋白质，由于其核苷酸序列的羧基端与小鼠Ras效应蛋白Nore1高度同源而得名。在包括肺癌、乳腺癌、肾癌、宫颈癌等常见肿瘤中发现RASSF1A启动子高甲基化和转录失活，且高甲基化与转录失活密切相关，体内及体外实验己表明RASSF1A可抑制肿瘤细胞系的生长，从而将其确定为3p21.3区域主要的侯选TSG［２，５，6］。　　在膀胱癌中，有学者对RASSF1

7、A基因展开了研究，并得出了相似的结果，但目前该基因异常改变与肿瘤临床病理参数相关性结论并不一致［８，９］。本研究结果表明，在膀胱癌中RASSF1A基因启动子频繁发生高甲基化改变，提示该基因甲基化可能与肿瘤的发生相关；虽然甲基化与肿瘤临床病理参数无显著相关性,但由于在Ⅰ级和Ta－T1期肿瘤中基因甲基化率均较高，结合本资料1例癌周正常组织中也发现基因甲基化改变，提示RASSF1A基因甲基化可能参与了该肿瘤发生的早期阶段，有望成为膀胱癌早期诊断的有用指标。在部分癌组织中，琼脂糖电泳同时检测到甲基化和未甲基化条带，这一方面可能因为两条等位基因中存在未甲基化等