hepacam基因启动子在膀胱癌中甲基化的研究

《hepacam基因启动子在膀胱癌中甲基化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文HepaCAM基因启动子在膀胱癌中甲基化的研究姓名：刘琪申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：罗春丽201205HepaCAM基因启动子在膀胱癌中甲基化的研究摘要第一部分外源性hepaCAM基因对膀胱癌细胞株周期影响目的：利用腺病毒载体将外源性肝细胞粘附分子(hepatocytecelladhesionmolecule，hepaCAM)导入膀胱癌细胞，检测hepaCAM对膀胱癌细胞株周期的影响。方法：构建野生型hepaCAM及空载腺病毒载体，感染人膀胱癌T24和BIU．87细胞，继续培养48小时

2、后，用半定量、定量PCR和Western．blot检测hepaCAMmRNA和蛋白的表达；FCM检测不同处理组细胞(分别为空白组，空载组，hepaCAM感染组)的细胞周期分布：Western—blot检测三组细胞cyclinDl蛋白的表达。结果：PCR结果显示hepaCAMmRNA成功表达于阳性hepaCAM感染组，空白组和空载组细胞无hepaCAMmRNA的表达；Western—blot显示相同的结果；FCM检测到hepaCAM阳性感染组细胞G0／G1期较空白组和空载组相比，明显升高(p<0．05)；Western．blot结

3、果显示：与空白组和空载组相比，hepaCAM感染组cyclinDl蛋白明显降低(p

4、浓度和不同时间处理T24和BU87细胞，分为DMS0组、未处理组和加药组；甲基化特异性PCR(Methylation．specificPCR，MSP)检测3组细胞中hepaCAM基因启动子的甲基化状态以及5-aza-CdR的去甲基化作用；Western-blot和Immunofluorescence(伍)检测药物处理后hepaCAM蛋白的重新表达；FCM检测各处理组细胞的周期分布。结果：MSP结果显示：在T24和BIU．87细胞株中，hepaCAM基因启动子区域都存在高甲基化，用5．aT_a．CdR处理后，其甲基化状态明显逆转；

5、药物处理的最佳作用浓度和作用时间分别为：T24(3uM，72h)，BIU．87(5uM，72h)。流式细胞术结果显示：5-aza-CdR处理细胞后，G0／G1期细胞百分数增加，并随着药物作用时间增加其百分数越高，与其他两组相比，具有统计学差异(p

6、M蛋白重新表达。4关键词：5-aza．CdR，甲基化，hepaCAM，MSP第三部分膀胱癌中hepaCAM基因启动子甲基化与hepaCAM蛋白表达及临床病理参数的相关性目的：研究hepaCAM基因启动子甲基化状态与其在膀胱癌中表达的相关性以及与临床病理参数的关系。方法：MSP技术检测30例膀胱癌组织及癌旁组织中hepaCAM基因启动子区域的甲基化状态；同时用Westem-blot检测hepaCAM蛋白的表达。结果：MSP结果显示：83．33％的膀胱癌患者中存在hepaCAM基因启动子的高甲基化，明显高于癌旁正常组织(33．3％)

7、(p

8、PACAMGENEPRoMoTERREGIoND呵BLADDERPARTONEEffectofexogenoushepaCAMgeneoncellcycledistilbutioninbladdercareinomacelllinesObjective：Toin