pcdh8基因及基因启动子甲基化在人结直肠癌中的研究

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1、UDC鱼!Q八年制博士学位论文学校代码!Q兰3三密级公珏PCDH8基因及启动子甲基化在人结直肠癌中的研究ThestudyofPCDH8gene，andpromotermethylationinhumancolorectalcancer作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：罗敏临床医学内科学中南大学湘雅二医院霍继荣教授论文答辩日期丝瞳!墨坪答辩委员会主席—丕陉缁够中南大学二零一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中

2、南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：#日期：盥年上月单日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：监年上月盟日PCDH8基因及启动子甲基化在人结直肠癌中的研究中文摘要第一章人结肠癌细胞中PCDH8表达及

3、启动子区域甲基化目的：结直肠癌是全球范围内发病率高和死亡率高的恶性肿瘤之一，在我国，结直肠癌居恶性肿瘤发病率的第3位，死亡率的第4位。DNA甲基化是结直肠癌研究的热点，DNA异常甲基化被认为是抑癌基因失活的一个重要原因，因此，其在结直肠癌的发生、发展及转移中起着关键的作用。在膀胱癌、胃癌、乳腺癌、鼻咽癌等恶性肿瘤的研究中，PCDH8基因被认为是一种可能的候补抑癌基因，但是在结直肠癌中尚无报道。该章研究的主要目的是比较人正常结肠上皮细胞株和人结肠癌细胞株中PCDH8mRNA、PCDH8蛋白水平及其启动子区域甲基化差异。方法：1、用ImPCR检测人结肠正常上皮细胞株(NCM460)和人结肠癌细胞株

4、(HT29、HCTll6、SW480、SW620)中PCDH8mRNA的表达；2、用w．erstemBl傩ing方法检测人结肠正常上皮细胞株(NCM460)和人结肠癌细胞株(HT29、HCTll6、SW480、Sw620)中PCDH8蛋白的表达；3、用甲基化特异性PCR(MSP)检测人结肠正常上皮细胞株(NCM460)和人结肠癌细胞株(HT29、HCTll6、SW480、SW620)中PCDH8基因启动子区域的甲基化。结果：1、PCDH8mRNA在人正常结肠细胞株NCM460中稳定表达，在人结肠癌细胞株HT29和HCTl16中表达缺失，在人结肠癌II细胞株SW480和SW620中表达下调；2、

5、人正常结肠细胞株NCM460中PCDH8蛋白稳定表达，人结肠癌细胞株HT29、HCTll6、SW480和SW620中，PCDH8蛋白表达下调；3、人正常结肠细胞株NCM460中，PCDH8基因启动子区域甲基化阴性；人结肠癌细胞株SW620、Sw480、HCTll6和HT29中，PCDH8基因启动子区域甲基化阳性。结论：PCDH8基因在人结肠癌细胞株SW620、SW480、HCTll6和HT29中表达下调，可能与PCDH8基因启动子区域甲基化有关，提示为结直肠癌发生发展的因素之一。关键词：PCDH8；甲基化；人结肠癌细胞株第二章人结直肠癌组织中PCDH8蛋白表达水平及其启动子区域甲基化目的：探讨

6、人结直肠癌组织、远离结直肠癌的正常组织和人结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白表达水平及启动子区域甲基化方法：1、用免疫组织化学染色检测结直肠癌组织、远离结直肠癌的正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白表达水平；2、用甲基化特异性PCR(MSP)检测结直肠癌组织、远离结直肠癌的正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8基因启动子区域的甲基化变化；3、应用SPSSl3．0软件，采用卡方检验统计学方法，分析PCDH8蛋白表达水平与结直肠癌患者临床病理参数的相关性；4、应用sPSSl3．0软件，采用卡方检验统计学方法，分析PCDH8基因启动子区域的甲基化变化与结直肠癌患者临床病理参数的相关性。结果：l、结直肠

7、癌组织中，16／68(30．77％)PCDH8蛋白阳性；远离结直肠癌的正常组织中，32／34(94．12％)PCDH8蛋白阳性；结直肠腺瘤组织中，16／20(80％)PCDH8蛋白阳性。远离结直肠癌的正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白阳性率均高于结直肠癌组织(P<0．01)，远离结直肠癌正常组织和结直肠腺瘤组织中PCDH8蛋白阳性率无显著差异(P=O．321)。2、结直肠癌组织中，56／68