生物钟基因hclock在人结直肠癌中的表达研究

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1、复旦大学博士学位论文生物钟基因hClock在人结直肠癌中的表达研究姓名：陈伯赞申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：傅德良；华鲁纯2012-04-102012年复旦大学博士学位论文生物钟基冈hCIock在人结直肠癌中的表达研究生物钟基因hClock在人结直肠癌中的表达研究中文摘要目的生物钟基因是设定并调控机体出现昼夜节律周期的系统，是一种以近似24小时为周期的振荡器。Clock基因处于生物钟基因家族的核心地位。结直肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，它的发生是多因素、多步骤的复杂生物学过程。许多研究表明，结直肠肿瘤的发生、发展与生物钟基因表达的异常存在关系，但其分子机制还知之甚少。本实验采

2、用分子生物学方法，研究hClock基因在人结直肠癌及正常肠道粘膜组织中的表达，hClock基因表达与肿瘤相关基因以及与肿瘤转移、病理分级、临床分期的关系。通过研究，为结直肠肿瘤的发病机制提供新的理论依据，并为肿瘤治疗提供新的靶点。样本本实验所用标本共30例，取自复旦大学生物医学研究院病理研究中心肿瘤组织库。标本采集于复旦大学附属华山医院普通外科自2007年1月至2008年9月行结直肠癌根治术患者的手术切除大体标本。标本采集于10：00～14：00时间段。在手术切除标本自体内切断所有血供后15分钟内，自肿瘤侵犯处肠壁粘膜面取材作为实验组，自远离肿瘤近标本切缘处肠壁粘膜面取材作为对照组，所取

3、标本立即投入液氮中妥善保存。并且完整收集所有患者的临床病史资料进行分析。所有病例术前均未发现肿瘤远处转移，未行放疗、化疗。所有病例经石蜡病理证实为结直肠腺癌，切缘均未见肿瘤累及。方法1．蛋白免疫荧光染色组织化学方法检测hCLOCK蛋白在癌组织与配对正常组织中表达的差异；2．荧光定量实时PCR方法检测hClock基因及肿瘤相关基因(Bak、Bax、Bid、HIF一1Q、ARNT、TNFRI、TNFR工I及VEGF)在癌组织与配对正常组织中表达的差异。2012年复旦大学博士学位论文生物钟基因hCIock在人结直肠癌中的表达研究结果1．所有标本中均有hCLOCK蛋白的表达；hCLOCK蛋白在人

4、结直肠癌中表达水平较正常组织明显升高，差异具有统计学意义(P<0．05)；hCLOCK蛋白在肿瘤分化差、TNM分期晚期的肿瘤中表达升高水平更为明显；64．3％有肿瘤淋巴结转移的病例中hCLOCK蛋白高表达；2．所有标本中均有hClock基因的表达；hClock基因在人结直肠癌中表达水平较正常组织明显升高，差异具有显著统计学意义(P

5、)；Bak基因表达水平增高，差异具有统计学意义(P<0．05)；Bax、Bid表达水平差异无统计学意义(P>0．05)；ARNT、HIF一1Q及VEGF在肿瘤分化差、TNM分期晚期的肿瘤中表达升高水平更为明显；所有14例有肿瘤淋巴结转移的病例中均有VEGF高表达；4．在人结直肠癌中，hClock基因表达水平与ARNT、HIF—lQ及VEGF基因表达水平呈线性正相关，差异具有统计学意义(P<0．05)；与Bak、Bax、Bid、TNFRI及TNFR工工表达无明显线性相关性(P>O．05)。结论1．生物钟基因hClock在人结直肠粘膜中存在表达；2．生物钟基因hClock在人结直肠癌中表达水

6、平较正常组织明显升高，并且与肿瘤进展、淋巴结转移相关；3．牛物钟基因hClock可能属于原癌基因；4．在人结直肠癌中生物钟基因hClock与HIF-1Q／ARNT及VEGF等肿瘤相关基因表达呈正相关。关键词结直肠癌，昼夜节律生物钟，生物钟基因，hClock中图分类号R62StudyonthepressionofclockgenehClockexpreSSlonObjectiveinhumancolorectalcarcinomaAbstractCircadiangeneiSasystemthatsetsandregulatescircadianrhythminorganisms，asan

7、oscillationwithanapproximate24一hourcycle．GenehClockiSatthecorepositionofthecircadiangenefamily．Colorectalcarcinomaisacommonmalignancyaffectinghumanhealthworldwide．Themolecularmechanismgoverningthedevc、lopmentofcolorect