mal基因在结直肠癌中的表达及临床意义

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1、MAL基因在结直肠癌中的表达及临床意义马荣强1樊军卫2周崇治2裘国强2彭炜3（通讯作者）（1第四军医大学第一附属医院消化外科710032）（2上海交通大学附属第一人民医院普外科200082）（3上海市中丙医结合医院普外科200082）【摘要】目的：探讨MAL基因与结直肠癌分化、分期和转移的关系。方法：收集结直肠癌手术切除标木30例，采用免疫组化两步法，检测30例结直肠癌及癌旁结肠组织MAL蛋白的表达水平。结果：结直肠癌及癌旁组织中MAL蛋白表达阳性率分别为20%和66.7%，MAL蛋白在结直肠癌组织的表达水平低于癌旁组织，有显著差异（P&

2、lt;0.01）,结直肠癌组织MAL蛋白表达水平在肿瘤的不同TNM分期及淋巴结转移之间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论：结直肠癌组织MAL基因在蛋白表达水平上显著低于癌旁组织，说明MAL基因低表达是结直肠癌发生发展的重要参与因素，提示MAL基因在结直肠癌的形成、发展中起重要的抑制作用。【关键词】MAL基因结直肠癌PCR免疫组化肿瘤抑制【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）14-0060-02引言MAL基因作为较新的抑癌基因tl渐受到重视。MAL在很多肿瘤组织中存在表达下调或缺失，

3、但对于MAL在结直肠肿瘤的相关报道在国内外很少。木研究通过免疫组织化学染色方法检测MAL基因在结肠癌及癌旁组织中的蛋白表达水平，分析MAL基因与结直肠癌发生发展的关系。1材料与方法1.1材料30例结直肠癌组织标木及与之匹配的30例癌旁组织对照标木（距肿瘤切缘5cm以上），均取自2010.9-2011.2上海市第一人民医院结直肠癌手术切除的新鲜标本。30例结直肠癌组织均为首发肿瘤，术前未予放化疗。在30例患者中，男性18例，女性22例；年龄45-87岁，平均年龄68.67岁。结肠癌19例，直肠癌11例;根据UICC制定的第七版结直肠癌TNM

4、分期系统分期。SQDNA/RNA/ProteinTissueKitR8042-01试剂盒（上海生工）；一抗（兔抗人），MAL（H-70）:sc-66978,（SantaCruz公司）；二抗（羊抗兔｝603!anti-RabbitlgG（H&L）-HRP：BS13278,（Bioworld公司DAB试剂盒（上海西唐）;NIKONTE2000S光学显微镜（Nikon公司）。1.2方法1.2.1免疫组化：①制作石蜡切片。②HE染色确诊。③免疫组化：组织切片脱蜡水化，高压热修复，3%H2O2-80%甲醇封闭，滴加一抗（1:50）,4°C过

5、夜;室温30min,加二抗（l:1000）100ul室温孵育30min,DAB显色，苏木素复染，脱水透明，树胶封片镜检。所有实验在没有一抗、二抗，或两个抗体都没冇的情况下作为阴性对照。1.2.2免疫组化结果判定：MAL染色定位于粘膜上皮的细胞浆与细胞核［1】，显微镜下以结直肠组织中粘膜上皮腺细胞内冇棕黄色颗粒沉着£L染色明显高于背景为阳性。取5个视野中阳性细胞的平均百分数作为每张切片的结果。将阳性细胞百分数进行半定量分级［2】：<5%为阴性（一）；5%〜25%为弱阳性（+）;25%〜50%为中度阳性（++）；≥50%为强阳性（

6、+++）；“+”及以上为阳性表达，用以计算阳性率。1.3统计学处理采用SPSS16.0软件包，阳性率比较采用Χ2检验及Fisher确切概率法；P<0.05为差异有统计学意义。2免疫组化结果2.1MAL在组织内的分布：MAL主要分布在癌旁组织的正常细胞内，在肿瘤细胞中表达较少或不表达（图1）。2.2统计结果：结直肠癌组织和癌旁组织MAL蛋白表达阳性率分别为20%、66.7%,冇显著性差异（P<0.01）。I、II期的结直肠癌组织标本MAL蛋白阳性表达高于III期，差别有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移的标本MAL蛋白阳性表达

7、低于无淋巴结转移的标本，差别有统计学意义(P<0.05)。MAL蛋白表达状态与患者年龄、性别、部位、分化程度、病理类型无统汁学意义(P>0.05)。见表1。3讨论MAL基因是由Alonso[3】等在1987年发现的一个在T细胞分化中晚期吋表达的基因。其cDNA编码一种高度疏水蛋白，最初推测它与T淋巴细胞分化成熟冇关，所以命名为T-lymphocytematuration-associatedprotein(MAL)。后来的研究表明，在癌细胞中MAL的表达可降低恶性细胞致瘤性[4]。MAL基因定位于2qll.l,其cDNA长为1051

8、bpoMAL蛋白分子质量16.7-kDa,在多种组织如呼吸系统、胃肠道、泌尿生殖系统等的上皮细胞内广泛表达。MAL、BENE、Plasmolipin和EST克隆H09290同属于一个大的基因家