mal基因在原发食管癌组织表达及临床意义论文

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1、MAL基因在原发食管癌组织表达及临床意义论文【摘要】目的探讨MAL基因表达下调与食管癌病理分期、组织学分级的相关性。方法采用RT-PCR和半定量RT-PCR方法检测45例食管癌组织和癌旁食管黏膜组织中MAL基因的表达。结果40例食管癌组织中MALmRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织(χ2=30.59,P0.01)；Ⅰ～Ⅱ期病人的MAL基因表达水平显著高于Ⅲ期病人（t=5.952，P0.001），淋巴结转移阳性病人MALmRNA表达水平显著低于淋巴结转移阴性病人（t=6.743，P0.001）。结

2、论MALmRNA在食管癌组织中的表达与临床分期、组织学分级等临床病理因素有一定相关性，可作为判断食管癌恶性程度、转移潜能及预后的实验室指标。【关键词】食管肿瘤;MAL基因；逆转录聚合酶链反应［ABSTRACT］ObjectiveToexploretherelevancebeti-quantitativeRT-PCRtechnique.ResultsThemRNAexpressionofMALin40cancertissuesamplesucousmembrane(χ2=30.59,P0.01).The

3、geneexpressioninstagesⅠandⅡpatientsphnodemetastasisshoiningtumormalignancyandpredictingitsprognosis.［KEYALgene;ReversetranscriptasepolymerasechainreactionMAL基因是由ALONSO等［1］于1987年分离得到的抑制肿瘤生长的新基因，MAL基因失活及异常与细胞信号转导、肿瘤的发生发展和临床预后等有一定关系。近年来，MAL基因与食管癌的关系已成为研究的热

4、点。本研究利用定性和半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测食管癌组织及其癌旁组织中MAL基因的表达情况，旨在探讨MAL基因在食管癌发生发展过程中的作用.freel3癌组织及5cm外癌旁组织，标本30min内送实验室，新鲜提取总RNA；不能保证30min内制备样品的，在取材后放-80℃冰箱保存备测。1.2检测方法采用半定量RT-PCR法检测MALmRNA的相对表达水平。①总RNA提取：采用Trizol提取总RNA，并进行纯度和浓度测定。②RT反应:于DEPC处理的Eppendorf管中，加入1

5、μg总RNA、MMLV及随机引物等，快速离心混匀后，37℃1h，95℃10min灭活MMLV，快速离心使蒸气沉于管底。③PCR反应：于0.5mLEppendorf管中加入RT反应产物、PCR反应体系、MAL上游引物（5′-AAGATCCTCTGCTGACCCCT-3′）、MAL下游引物(5′-ACCATGGACCTCTGGAAAGA-3′)、β-actin上游引物(5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′)，以及β-actin下游引物(5′-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC

6、-3′)，扩增片段长度为500bp；95℃5min，离心使蒸气沉于管底，加TaqDNA聚合酶，快速离心混匀。循环条件：94℃1min，58℃1min，72℃1min，循环35次，末次延伸7min。电泳鉴定，观察目的基因，实验中仅出现一条500bpβ-actin条带为MALmRNA阴性；同时出现166bp条带为MALmRNA阳性。采用数字图像分析仪2200系统观察拍照并进行半定量分析，以MAL／β-actin比值作为MALmRNA相对表达量，若比值小于25％为表达缺失，若比值小于50%则为低表达，低表达

7、与表达缺失均为异常表达。1.3统计学分析应用SPSS10.0统计软件，对定性RT-PCR结果进行χ2检验及确切概率法；对半定量RT-PCR结果进行t检验。2结果2.1食管癌组织和癌旁组织中MALmRNA的定性检查结果比较45例食管癌组织中未见MAL表达者28例，弱表达者12例；癌旁组织食管黏膜组织MALmRNA全部呈阳性表达。食管癌组织中MALmRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织，差异有显著性(χ2=30.59,P0.01)。见图1。图1RT-PCR检测食管癌组织MALmRNA的表达①、②为食管

8、癌组织MALmRNA表达阳性；③、④为食管癌组织MALmRNA表达阴性；⑤为X174/HaeⅢ分子质量标志物2.2MALmRNA的半定量RT-PCR检测2.2.1食管癌组织和癌旁组织中MALmRNA表达水平比较本文45例食管癌组织MALmRNA相对表达水平为0.90±0.11，而癌旁组织中MALmRNA的表达水平为1.51±0.27，两者比较差异有统计学意义(t=2.329，P0.05)。2.2.2食管癌组织MALmRNA表达水平与临床病理分期的关系MA