肝细胞癌中dek基因启动子甲基化研究

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1、多臻万方数据)!p／，l必．硕士学位论文肝细胞癌中DEK基因启动子甲基化研究StudiesontheMethylationofDEKPromoterinHepatocellularCarcinoma作者：李纯导师：胡红刚北京交通大学北尿父遇大字2014年6月万方数据学位论文版权使用授权书jnllllllllIIIIIIIIIII111111IllIIIJY2733794本学位论文作者完全了解北京交通大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权北京交通大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，提供阅览服务，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅

2、和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。学校可以为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递服务和交换服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明)学位论文作者签夤易歹李多鼬签字日期：xl≯年护铜，‘日翩虢柳∥／7签字日期：夕f丫年。加，／日万方数据学校代码：10004北京交通大学硕士学位论文肝细胞癌中DEK基因启动子甲基化研究密级：公开StudiesontheMethylationofDEKPromoterinHepatocellularCareinoma作者姓名：李纯导师姓名：胡红刚学位类别：理学学号：11121799职称：副教授学位级别：硕

3、士学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：肿瘤分子生物学北京交通大学北尿父迥大字2014年6月万方数据致谢时间如白驹过隙，随着毕业论文的完成，三年的研究生生活也接近尾声。漫漫求学路即将结束，内心饱含不舍和感恩。本论文是在我的导师胡红刚副教授的精心指导下完成的。从论文的选题到实验方案的确定，从每一次阶段性实验结果的得出到对实验结论的推敲，都倾注了胡老师大量的心血。胡老师治学细致严谨，学识扎实深厚，在科研的道路上使我受益良多。他又以他的宽厚待人，为人师表，成为我们做人的榜样。在此，谨向胡老师致以最诚挚的感谢和敬意!感谢研究生就读期间传授知识并给予我帮助的每一位老师。感谢

4、何金生老师，朱运峰老师，侯玲玲老师，江红老师，晏琼老师，郑妍鹏老师，纪丰民老师，张莹老师，丁克俭老师，他们精彩而严谨的授课使我收获颇多。感谢王字玲老师，黄家强老师，张丽姝老师，徐青老师对我的课题给予的帮助。本论文的完成也离不开师姐杨辛、郭芳以及焦月盈、华颖的无私帮助，她们经常不厌其烦的解答我的疑惑，并细心地指出我的疏漏，是我学习和科研上的良师益友。在生活上，她们同样给我许多的关心和帮助。感谢师弟周千程，师妹乔明旭对我科研道路上的陪伴和帮助。由衷地感谢我的同学们，他们活跃而富有创造性的思维开阔了我的学术眼界，拓展了我的科研思路。生活中更是离不开他们的关心和照顾，正因为

5、有了他们，才使我的研究生生活如此快乐而充实。感谢我的父母，他们给予我生命，为我的成长和成才无私地付出。在读研的三年里，每每遇到生活上或科研上的困难，他们都能够给予我最大的支持和鼓励，是我最坚强的精神后盾。此时，用任何的辞藻都不足以表达对父母的感激，而他们能够永远健康快乐是我此时最大的心愿。还要感谢其他的亲人，朋友们，是你们的鼓励和支持使我顺利完成了硕士学业。特别感谢301医院为本实验提供的支持和帮助。最后，衷心地感谢辛勤评阅本论文的专家和教授们!万方数据摘要摘要：目的：DEK蛋白最初被发现于急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，AML)中，它与C

6、AN形成DEK．CAN融合蛋白。DEK在多种肿瘤中呈现过表达，显现出与肿瘤发生发展的密切关系。DEK基因在肝细胞癌(hepatocellularcarcmoma，HCC)中的表达量明显高于正常肝细胞，提示DEK可能在HCC的发病机制中发挥重要作用。我们希望通过研究腿K基因启动子区域在HCC细胞系中的甲基化水平与DEK表达量之问的关系来阐明DEK基因在HCC中表达上调的表观遗传学机制。方法：选取七种HCC细胞系，以一种正常肝细胞系和一例正常肝组织作为对照，通过荧光定量PCR和Westernblotting方法，分别检测DEK在mRNA水平和蛋白水平的表达量。应用亚硫酸

7、氢钠一基因组测序法(Bisulfitegenome—sequencing，BGS)测定DEK基因启动子区域的甲基化水平，并获得了详细的甲基化位点。应用生物信息学方法对DEK启动子区域进行分析，确定其可能的转录因子结合位点。应用PCR法扩增了位于DEK基因启动子区域的4个片段，分别将用甲基化酶处理过和未处理过的各片段插入荧光素酶报告基因表达载体，重组质粒转染HepG2细胞，检测荧光素酶表达活性。结果：DEKmRNA和蛋白表达水平在HCC细胞中均上调。BGS法检测结果显示，DEK基因启动子区域CpG岛甲基化水平在HCC细胞系中明显下调，正常肝细胞和正常肝组织的DEK