鼻咽癌中pcdh17基因启动子甲基化状态的研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文鼻咽癌中PCDH17基因启动子甲基化状态的研究姓名：胡琴申请学位级别：硕士专业：耳鼻咽喉科学指导教师：胡国华201205重庆医科大学硕士学位论文鼻咽癌中PCDHl7基因启动子甲基化状态的研究摘要目的探讨鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma，NPC)qbPCDH17基因启动子区CPG岛的甲基化状态，以及其对PCDHl7mI斟A转录、蛋白表达的影响。探讨PCDHl7基因在鼻咽癌中所起的作用。方法运用半定量反转录PeR(reversetranscriptionpolyme

2、raseChainPCRRT-PCR)和甲基化特异性PCR(Methylation-specificPCR,MSP)检测5株鼻咽癌细胞株，人喉鳞癌细胞株(Fadu)，正常鼻咽上皮永生细胞系(NP69)qbPCDHl7mRNA的表达情况及PCDHl7的甲基化情况。用MSP检测鼻咽癌及正常组织中PCDHl7DNACPG岛的甲基化情况。应用去甲基化药物处理细胞株后检测PCDHl7mRNA表达的变化及PCDHl7基因甲基化的改变。构建PCDHl7质粒转染细胞得到稳定细胞株后，应用细胞克隆形成实验及划痕实验检测PCD

3、Hl7在鼻咽癌中的功能。结果本研究检测到鼻咽癌细胞株5株中均无PCDHl7mRNA表达，Fadu中无表达，NP69qb有表达。鼻咽癌组织中甲基化率为83．3％(35of42)，正常鼻咽组织的甲基化率为17．6％(3of17)。正常组织与鼻咽癌组织之间甲基化率有统计学差异(P

4、岛甲基化导致PCDHl7mRNA表达下调，同时提示PCDHl7基因在鼻咽癌中发挥着抑癌基因的功能。关键词鼻咽癌，甲基化，PCDHl7METHYLATIONSTATUSOFTHEPCDHl7GENEPROMOTERINNASOPHARYNGEALCARCINOMAABSTRACTObjectiveToinvestigatePCDH17genepromotermethylationstatusanditsimpactonthetranscriptionalexpressionofPCDHl7inNPC(Naso

5、pharyngealcarcinoma，NPC)celllines．andtoinvestigatethefunctionofPCDH17innasopharyngealcarcinoma．MethodsSemi。quantitativereversetranscriptionPCR(reversetranscriptionpolymeraseChmnPCR，RT—PCR)andMethylationspecificPER(Methylation。specificPCR,MSP)wereusednotonl

6、ytodetecttranscriptionlevelandpromotermethylationstatusofPCDH17geneinfiveNPCcelllines，humanlaryngealcarcinomacellline(Fadu)，nomlalimmortalizedepithelialcelllines(NP69)，andNPCtissues，nonnaltissuesbutalsoafterNPCcelllineswereexposedtodemethylatingagent．netum

7、or-suppressiVefunctionofPCDH17inNPCCanCerwasinvestigatedfurtherinvitroassays．ResultsTheexpressionofPCDHl7mRNAwasfoundinNP69butnotfoundin5NPCcelllines．MethylationspecificPCRanalysisrevealedthatthePCDH17promoterwashighlymethylatedin100％(5／5)ofNPC4celllines，8

8、3．3％(35of42)ofprimarytumors，whereasonly17．6％(3of17)ofNon。malignantnasopharynxtissuesexhibitedhypermethylationinthePCDHl7promoterregion．DemethylatingagentcouldrestoretheexpressionofPCDH17mRNA．TheCellfunctionex