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1、HHIP基因启动子区甲基化在食管癌细胞系中的研究收稿日期：*基金项目：：国家自然科学基金(30771099)SuppoaedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(30771099).作者简介：邱宗林(1983－ )，男，山东省聊城市人，硕士生，研究方向：Hedgehog信号通路与肿瘤。**通讯作者:叶彬，YEBinTel:86-023-68485288,Email:yebina@sohu.com陈香梅，Tel:86-010-82805137,Email:
2、xm_chen6176@bjmu.edu.cn邱宗林1/许强2/王永峰2/陈香梅2**/叶彬1、3**(1.重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室，重庆,400016；2.北京大学医学部基础医学院病原生物学系，北京,100191；3.重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心，重庆,400016)【摘要】目的探索人食管癌细胞系Hedgehog信号通路相关基因的表达状况、HHIP基因启动子区甲基化状态与HHIP表达的关系。方法采用RT-PCR方法检测5个食管癌细胞系Hedgehog信号通路SHH，PTCH，SMO
3、，HHIP和Gli的表达情况。用基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切、并结合荧光定量PCR方法分析食管癌细胞系HHIP基因启动子区甲基化状态，并检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后食管癌细胞系HHIPmRNA表达的变化。结果SHH，PTCH，SMO和GlimRNA在5个食管癌癌细胞系中都有较高表达。HHIP只在Kyse450细胞系中表达较高，在其余4个细胞系中表达很低。与之相应，Kyse450细胞HHIP基因CpG岛为非甲基化，其余4个细胞系CpG岛都发生了高甲基化
4、。采用5-Aza-CdR去除甲基化后，HHIP基因的表达明显上调。结论Hedgehog信号通路的异常激活可能参与了食管癌的发生发展过程，食管癌细胞系HHIP基因的表达抑制与其基因启动子区CpG岛高甲基化可能相关。【关键词】Hedgehog信号；HHIP基因；食管癌；细胞系PromotermethylationofHHIPgeneinesophagealcancercellLineQIUZonglin1，XuQiang2，WangYongfeng2，ChenXiangmei2，YEBin1，3**,(1.
5、DepartmentofPathogenicBiology,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing4000162．DepartmentofPathogenicBiology，HealthScienceCenter，PekingUniversity，Beijing,l00191．China3.ResearchCenterforMolecularMedicineandTumor,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China,
6、)【ABSTRACT】ObjectiveTodetecttheexpressionofmRNAofHedgehog(Hh)pathwayrelatedgenesinesophagealcancercelllines,andtherelationshipofpromotermethylationofHHIPgeneanditsexpression.MethodsWithmethylation-sensitiveenzymeand9methylation-dependentenzyme,Quantitativ
7、ePCRwasusedtodetectmethylationinthepromoterregionofHHIPgeneinesophagealcancercelllines,andHHIPmRNAexpressionchangesbeforeandaftertreatedwithDNAmethyltransferaseinhibitor5-Aza-CdR.ResultsSHH，PTCH，SMOandGlimRNAwasdetectedpositiveinfiveesophagealcancercellli
8、nes.ThehighexpressionofHHIPwasonlyinKyse450cellline,intheotherfourcelllinestheexpressionofHHIPwaslow.Correspondingly,TheCpGislandsofHHIPgeneareunmethylatedinKyse450,intheotherfourcelllinesarehypermethylated.Treatmen
