骨肉瘤中wif-1基因启动子区异常甲基化及mrna的表达研究

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1、分类号：R738.1密级：不保密UDC：610学校代码：11065硕士学位论文骨肉瘤中WIF-1基因启动子区异常甲基化及mRNA的表达研究康学华指导教师李书忠教授学科专业名称外科学（骨外）论文答辩日期2015年5月31日骨肉瘤中WIF-1基因启动子区异常甲基化及mRNA的表达研究摘要目的：WIF-1作为Wnt家族成员之一，通过结合Wnt蛋白来抑制Wnt信号通路的传导，影响细胞内基因表达。本实验通过检测骨肉瘤中WIF-1启动子区甲基化状态及mRNA的表达水平，探讨两者与骨肉瘤临床病理关系，为骨肉瘤患者的临床治疗奠定理论基础。方法：搜集从2008年到2014年青岛大学附属医院病

2、理科石蜡包埋骨肉瘤组织标本以及手术切除置于-70℃保存的骨肉瘤组织40例为实验组，石蜡包埋骨软骨瘤组织以及手术切除置于-70℃保存的骨软骨瘤组织20例为对照组，并采集患者就医材料以及病理诊断信息。通过利用甲基化特异性PCR技术（methylationspecificPCR，MSP）检测骨肉瘤组织及骨软骨肉瘤组织中WlF-1基因启动子区甲基化状态，研究WlF-1基因甲基化状态与临床病理学之间的相关性。应用实时荧光定量RT-PCR技术检测WIF-1基因mRNA在骨肉瘤组织及骨软骨肉瘤组织的表达水平，研究mRNA的相对表达量在骨肉瘤组织及骨软骨肉瘤组织的表达差异以及其与临床病理学

3、之间的关系。综上所述，分析骨肉瘤中WIF-1基因甲基化率与mRNA相对表达量之间的关系,探讨两者在骨肉瘤发生发展过程中的作用。采用SPSSl9.0统计软件对所有数据进行统计学处理，运用X2检验或Fisher精确概率法，t检验等统计学方法，均用双侧检验的方法，以P<0.05为差异具有统计学意义。结果：1.WlF-1基因在骨肉瘤组织中甲基化率55%(22/40)明显比骨软骨瘤组织甲基化率高20%(4/20)（P<0.05）。WIF-1基因甲基化阳性率与年龄、性别等无相关性(P>0．05),但是在骨肉瘤病理低分化组甲基化所占比例82.61%（19/23）明显高于骨肉瘤高分化组甲基

4、化所占比例17.65%（3/17）(P<0.05)。2.WIF-1基因mRNA的相对表达量在骨肉瘤组和骨软骨肉瘤组分别是(0.361±0.303)和(0.760±0.256)(P<0.001)。WIF-1基因mRNA的相对表达量与年龄、性别等无相关性(P>0．05),但是在病理低分化组为（0.201±0.233）明显低于高分化组甲（0.578±0.250）(P<0.001)。3.骨肉瘤中WIF-1启动子区甲基化状态的mRNA相对表达量（0.139±0.131）明显低于非甲基化状态的mRNA的相对表达量(0.642±0.188)（P<0.001）。结论：WIF-1基因启动子区

5、甲基化可能异常激活经典和非经典Wnt信号通路，影响mRNA相对表达量，从而影响骨肉瘤的发生发展过程。硕士研究生：康学华指导教师：李书忠关键词：骨肉瘤；WIF-1基因；甲基化；实时荧光定量RT-PCRWntinhibitoryfactor-1inactivationandaberrantpromotermethylationinosteosarcomaAbstractObjective:AsoneofthemembersofthefamilyofWnt,WIF-1affectthegeneexpressioninthecellbycombiningWntproteintosu

6、ppresstheconductionofWntsignalingpathways.Inthisexperiment,wewillexploretherelationshipbetweenclinicalpathologicalosteosarcomabydetectingosteosarcomaWIF-1promoterregionmethylationandmRNAexpressionlevel,providingthetheoreticalbasisfortheclinicaltreatmentofpatientswithosteosarcoma.Methods:40

7、paraffinembeddedosteosarcomatissuesand20matchedparaffinembeddedtissuesofchondromawasprocuredfromtheAffiliatedHospitalofQingdaoUniversityafterapprovalfrom2008to2014andprocuredhospitalizedandpathologicaldiagnosisinformation.ByusingmethylationspecificPCRtechnolog