食管鳞状细胞癌中apaf-1基因表达及启动子区甲基化研究

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1、河北医科大学硕士学位论文食管鳞状细胞癌中Apaf--1基因表达及启动子区甲基化研究姓名：马洪亮申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：单保思201203中文摘要食管鳞状细胞癌中Apaf-I基因表达及启动子区甲基化研究摘要我国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家，其中95％以上食管癌为食管鳞状细胞癌(esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC)。尽管近年来对食管癌的防治做了大量的工作，其发病率和死亡率仍居高不下。探索食管癌的发病病因及有效的基因治疗方法，是降低食管癌发病率及死亡率的重要途径。凋亡蛋白酶活化因子．1(Apoptosisprotea

2、seactivatingfactor-1，Apafl)基因是c—Myc诱导肿瘤细胞凋亡中p53的下游成分，在线粒体凋亡途径中是重要促凋亡因子，在多种肿瘤中可发现Apaf-1的表达降低，但研究证实Apaf-1基因很少发生突变，启动子区甲基化引起的基因功能沉默可能是该基因表达下调的主要原因。但此基因在食管鳞癌中的表达及甲基化状态国内外未见报道。EZH2(enhancerofzestehomolog2)是PcG家族成员之一，是构成PRC2复合物的核心元件，PRC2复合物通过EZH2基因的SET结构域对核小体组蛋白H3的9、27位赖氨酸进行甲基化修饰而沉默靶基因，导致肿瘤的发生。在

3、多种肿瘤中可发现EZH2蛋白表达的升高，并且P53可下调EZH2的表达而发挥其细胞复制性衰老的作用，在膀胱癌中EZH2的高表达伴随着Apafl的异常高甲基化，但是作为与P53通路密切相关的基因，Apaf-1和EZH2在食管鳞癌中的关系尚未见报道。目的：本研究通过检测食管鳞状细胞癌组织中Apaf-1的mRNA和蛋白表达水平，明确其在食管鳞癌中的表达状况，通过检测其启动子区的甲基化状态进一步对其在食管鳞癌中低表达的可能机制进行研究，并深入地探讨Apaf-1与EZH2之间的关系，为确定Apaf-1甲基化与食管鳞癌发生发展之间的关系提供理论依据，为食管癌的诊治和预防提供新的分子指标

4、。方法：应用半定量RT-PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)的方法检测食管鳞癌@Apaf-1的mRNA表达，采用免疫组织化学方法检测食管鳞癌qbApaf-1和EZH2的蛋白表达，采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylationspecificPCR，MSP)的方法检测食管鳞癌@Apaf-l中文摘要基因启动子区的甲基化状态，并应用SPSSl3．0统计软件对数据进行统计学分析。‘结果：1食管鳞癌组织中Apa91基因mRNA表达水平显著低于相应的癌旁正常组织(0．4124士0．181lVS．0．9165士0．3178

5、，P<0．01)，并与肿瘤TNM分期及组织分化程度密切相关，但与肿瘤患者的年龄、性别无关。2食管鳞癌组织Apagl蛋白表达阳性率为41．4％(53／128)，显著低于相应癌旁正常组织的蛋白表达阳性率94．5％(121／128)(P<0．01)。III期和Ⅳ期食管鳞癌患者Apagl蛋白表达水平显著低于I期和II期患者(P<0．05)，随着肿瘤组织分化程度的降低Apagl蛋白阳性表达率逐渐降低(P

6、癌患者EZH2蛋白表达水平显著高于I期和I【期患者(P<0．05)，随着肿瘤组织分化程度的降低EZH2蛋白阳性表达率逐渐增高(P<0．05)。4Apagl基因在肿瘤组织中的甲基化率为52．3％(67／128)，显著高于癌旁正常组织的甲基化率4．7％(6／128)(P<0．01)。III期和Ⅳ期食管鳞癌患者癌组织中Apagl基因发生甲基化的比率显著高于I期和II期患者(P

7、ZH2的蛋白表达呈明显的负相关。结论：1食管鳞癌组织中Apagl的mRNA和蛋白表达显著低于癌旁正常组织，Apag!基因启动子区的异常高甲基化可能是食管鳞癌中此基因失活的重要原因之一。2食管鳞癌中Apagl基因甲基化与其mRNA和蛋白表达有明显的相关性，且与肿瘤分期和上消化道肿瘤家族史密切相关。提示Apagl基因与食管鳞癌的进展有关。±查塑墨；—一‘—————————————————————————————一3食管鳞癌中EZH2基因表达升高，并与Apaf_1的表达呈明显的负相关，提示Apaf-l和EZH2可能共同参