髓系肿瘤中hage基因启动子低甲基化的临床研究

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1、江苏大学硕士学位论文髓系肿瘤中HAGE基因启动子低甲基化的临床研究姓名：陈芹申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：钱军20120616江苏大学硕士学位论文摘要目的研究髓系肿瘤骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome，MDS)、急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，AML)和慢性髓系白血病(chronicmyeloidleukemia，CML)患者中螺旋酶抗原(helicaseantfgen，黝钮)基因启动子区域的甲基化状况，并分析其临床相关性。方法应用实时定量PCRQeal-timequantitativePCR，RQ-PCR)●技术

2、检测27例MDS患者、78例AML患者、35例CML患者及24例缺铁性贫血(IDA)对照组骨髓单个核细胞标本的HAGEmRNA水平。应用实时定量甲基化特异性PCR(real—timequantitativemethylation—specificPCR，RQ—MSP)技术检测90例MDS患者、214例AML患者、87例CML患者及24例IDA对照组骨髓单个核细胞标本的删钮基因启动子未甲基含量。应用亚硫酸氢盐测序(bisulfitesequeficing)分析MDS、AML患者朋钮启动子和第一外显子的甲基化密度。结果造血系统髓系肿瘤中存在不同程度的删钮基因低甲基化：①90例MDS患者

3、中27例(30％)存在埘钮基因低甲基化，埘钮基因甲基化改变与患者年龄、性别、白细胞计数、血小板计数均无相关性(P>O．05)，但低甲基化患者的血红蛋白水平明显低于甲基化患者(P=0．047)；低甲基化频率与患者的FAB分组、WHO分型和IPSS分组无相关性(P>O．05)，但在核型正常的病人中，础钮低甲基化髓系肿瘤中删∞基因启动子低甲基化的临床研究病人的总体生存时间(未获得中位数)明显长于甲基化病人(中位数16月，可信区间4．9"-'27．1月)(#=3．906，P=O．048)；朋钮未甲基化水平与肱钮转录本水平正相关(r=0．520，P=-O．005)；RQ-MSP结果和亚硫酸氢

4、盐测序结果高度相关。标本总体甲基化密度和朋诬表达负相关：1例朋钮表达阴性的对照标本高度甲基化，而2例朋钮表达阳性的MDS标本甲基化程度明显降低。②214例AML患者中32例(15％)为朋钮低甲基化；男性患者中朋钮低甲基化频率(19．5％，24／123)高于女性患者(8．8％，8／91)(仁O．033)，低甲基化频率与患者的年龄、白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均无相关性(P>O．05)；FAB分型中，朋诬低甲基化频率为M3>M6>M4>M5>MI>M2，组间差异有统计学意义(P=O．019)；核型危险分级中朋诬低甲基化频率表现为低危组(22．4％)>中危组(15．7％)>高危组

5、(O％)，组间差异有统计学意义(P=O．013)。t(15；17)患者埘钮低甲基化频率(33．3％)明显高于其他组(13．6％)(卢O．005)，11q23重排／复杂异常／t(9；22)患者中删钮启动子低甲基化频率明显低于其他组(P=-0．01)；删钮未甲基化水平与／／AGE表达水平正相关(严0．277，P=0．014)；RQ-MSP结果和亚硫酸盐测序结果高度相关，且标本总体甲基化密度和朋钮表达负相关。③87例CIVIL患者中22例(25．3％)存在础钮启动子低甲基化，低甲基化频率与患者年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数及染色体异常分组均无相关性(尸>0．05)；慢性

6、期、加速期、急变期患者埘晒启动子低甲基化频率分别为23．4％(15／64)、25．O％lI江苏大学硕士学位论文(2／8)、33．3％(5／15)，三组间差异无统计学意义(JP>O．05)；捌钮未甲基化水平与朋钮转录本水平正相关(F0．469，P=-O．004)。结论①脚钮启动子低甲基化是造血系统髓系肿瘤MDS、AML和CML患者中的一个常见分子事件；②朋钮启动子低甲基化是MDS患者中预后良好的一个分子标记；③倒钮启动子低甲基化与AML低中危核型密切相关。关键词删钮基因，低甲基化，髓系肿瘤，RQ---PCR，RQ-MSP，亚硫酸氢盐测序III髓系肿瘤中朋∞基因启动子低甲基化的临床研究

7、objectiveToinvestigatethemethylationstatusofhelicaseantigen(删回genepromoterandanalyzeitsclinicalrelevanceinpatientswithmyeloidmalignanciesincludingmyelodysplasticsyndrome(MDS)，acutemyeloidleukemia(AML)andchronicmyeloidleukemia(CML)．Metho