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1、。第期广西农学院学报了年植物体细胞杂交和原生质体培养何若天一、、摘要本文综述了近年有关植物原生质体融合杂种细胞的筛选休细胞。杂种性状的分析和原生质体培养等方法,,。,为改良作物在近缘植物中主要用有性杂交但在远缘植物间有性杂交常受性。不亲和之限制细胞融合术乃克服有性杂交所遇种间障碍之一法,。当分离自两种植物的原生质体被诱导融合后通常产生有同核体和异核体同核体,。是由同一亲本原生质体融合而得它在体细胞杂交中无多大意义异核体是由两亲本原,。冬异核体在合适条件生质体融合而得具有双亲的基因组是为细胞融合所祈求的产物,,下培养时随翅胞有丝分裂来自双
2、亲的核基因可能重组而成保持有双亲核基因的异源,。双二倍休即所谓对称杂种扣或和谐体细胞杂种但在不少场合,,中植物杂种细袍内双亲中的一方或双方的染色体往往发生不同程度的排除现象因而,产生一些含有一方核基因和双方部分胞质基因的胞质杂种或含有一方的全部或大部分该基因和另一方的少部分核基因的所谓不对称杂种执。或部分和谐体细胞杂种或在异核融合前即各自产生了新的核膜并形成胞壁分别连续分。,、裂而形成嵌合体因此植物细胞融合术在下列三方而可能有用、在性不亲和的种间培育能育的双二倍体体细胞杂种通常只能进行营荞体繁殖的植、“”。物中培育杂合型体细胞杂种利用染
3、色体排除现象培育胞质杂种或不对称杂种〔‘〕,、、前文己介绍植物原生质体的分离本文着重对原生质体融合杂种细胞的筛选。细胞杂种性状分析和原生质体培养等法作一简介原生质体的融合,,植物体内相邻细胞因有胞间联丝存在常见核穿壁或染色质穿壁运动导致相邻细。“。胞间发生细胞融合这是植物本身在自然状态下一种固有的正常生理现象〔〕用胞,壁降解酶分离植物原生质体期间更常见相邻细胞因胞间联丝的保留和扩张而融合成较,,。大的双核三核乃至多核原生质体称自发融合一般年幼组织和比母细胞更易产生自。,,发融合而成多核原生质体不同种植物原生质体混合由于静电排斥不能发生自
4、发融,,合须赋予一种诱导因素使原生质体彼此紧靠在相互粘着的局部质膜发生融合后才能,。实现细胞融合而成异核体此种融合称诱导融合原生质体诱导融合现象最早是在洋葱表皮细胞内的游离亚原生质。体能为钠盐引起融合中观察到后来以为质壁分离剂时在不同。“。。植物细胞中亦见融合现象这些工作直至等〔〕报导能诱导禾谷类作,。,。物根游离原生质体融合前几乎未引起人们注意年等用诱导、粉蓝烟草和朗氏烟草原生质体融合育出第一“,。个种间杂种〔〕以来诱导原生质体融合工作才蓬勃开展对融合方法作了许多研,。。究技术上大有改进迄今已获成功的诱融方法可分化学法和物理法两类一化
5、学诱融法、硝酸钠法以溶于肠蔗糖或甘露醇溶液中配成肠浓度为诱融,,剂此液能引起原生质体聚集将两种不同植物原生质体等量混匀后悬浮在上述溶液内,“,置℃水浴中保温分钟在下离心分钟可获致密丸状沉淀再置于℃,,,水浴内保温分钟此时部分原生质体发生融合然后用含肠的原生质体培,养液非常缓慢地勿搅乱丸状沉淀取代原溶液静置一段时间后用培养液洗涤两遍便‘’。,,可植板培养〔〕硝酸钠法的主要作用因素是钠离子但上述诱融浓度对细胞有害““,。而且诱融率比自发融合率高不了多少〔〕故目前已很少采用、〔石”二。高钙法为和所建立该法是以甘氨酸一·。缓冲液中溶有和。甘露醇
6、为诱融剂等量,,‘混合好的原生质体悬浮在此液中在下离心分钟把离心管置水浴中保温。,。,。一分钟此期间原生质体便发生融合在不少实例中总融合率可达一肠、‘。“聚乙二醇法卜和〔〕发现聚乙二醇能稳定游离,’”“’。原生质体从而导致和创立诱融法该法如下配制,·原生质体融合所需溶液①诱融剂溶液中含,、。和分子量可用或、②洗涤液即高液液一中含甘氨酸,·用调为,葡萄糖液中含一、、。,葡萄糖使用时将二液等量混合③原生质体培,,。。养液按要求可用任何合适的培养基但须含有合适浓度的渗透压稳定剂如一‘。,。甘露醇或山梨醇〔〕上述溶液均经过过滤灭菌在℃下贮存融合
7、处理,按下列步骤进行①在培养皿内加一滴硅酮液也可不加在硅,酮液上放一块盖玻片使盖玻片粘牢在底皿上②吸取已混匀的原生质体悬浮,液放在盖玻片上静置一分钟让原生质体下沉固定在玻片上③用微量吸管吸取·,,,溶液小心地从原生质体悬浮液四周滴入令溶液与原生质体接触,在室温一℃下保温分钟以便原生质体充分相互粘连④吸取洗涤液缓慢地从一侧或四周滴入原生质体和,混合液中,静待分钟后再加。,洗涤液再静置分钟⑤用微量吸管缓慢地从一侧吸去和洗涤液但,,,勿吸干在另一侧加入原生质体培养液如此每隔分钟反复加液一次,。充分洗去和洗涤液最后一次洗涤后加入适量培养液进行培
8、养’,“、“〕、。‘诱融是非特异性的故此法已在高等植物〔〕真菌〔酵母〔〕。,,等原生质体以及动物细胞融合中广泛应用在植物中此法可获相当高的融合率回收,〔““〕的异核体可达肠由于与高液配合处理所得异核体可高达
