基于meq基因的MDV感染PCR检测方法的建立与应用研究

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1、分类号曼墨§墨：兰!UDC一密级编号硕士学位论文基于meq基因的MDV感染PCR检测方法的建立与应用研究国家自然科学基金项目(30460099)广西自然科学基金项目(桂科自0339003)杨先荣论文答辩日期2Q!Q生鱼旦!Q旦学位授予日期2Q!Q生鱼旦答辩委员会主席值歪苴麴援论文评阅人塞遄良数援．生鲑担．塾援0。j●pl^i囊，}；I■，}‘'i≯-■。≥}-lIlllllILIllIllllllILtIII111111111IY1737722广西大学学位论文原创性声明和使用授权说明学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师指导下完成的，研究工作

2、所取得的成果和相关知识产权属广西大学所有，本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容。除已注明部分外，论文中不包含其他人已经发表过的研究成果，也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助的个人和集体，均已在论文中明确说明并致谢。论文作者签名：学位论文使用授权说明厶／口年6月弓。日本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本：学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目

3、的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。请选择发布时间：嘶口时发布口解密后发布(保密论文需注明，并在解密后遵守此规定)论文作者签名导师签名：删口年‘月岁口日‘．’扣^■基于meq基因的MDV感染PCR检测方法的建立与应用研究摘要马立克氏病(Marek’SDisease，MD)是由马立克氏病病毒(Marek’sDiseaseVirus，加V)引起的一种鸡的恶性淋巴细胞增生性肿瘤疾病，具有高度接触传染性，可在各种内脏器官、皮肤等多处诱发广泛性淋巴细胞增生性肿瘤。感染后大量淋巴细胞发生损伤和转化，引起鸡体持续性免疫抑_．制、导致患病鸡群原发或继发感染引起的

4、死淘率升高。随着MD毒株毒力不Ilp断增强，通过疫苗免疫己不能为商业鸡群提供完全保护力，给目前养禽业带来巨大的损失。一般在生产上使用基于疫苗株与野毒株132．叻基因拷贝数差异而建立的多聚酶链式反应(PCR)检测方法进行MDV感染快速诊断，但由于疫苗免疫、个体差异和不同毒株的体内复制能力不同等因素共同作用，造成检出率偏低，诊断准确性不足，本试验旨在建立一种更为准确的～MDV感染PCR检测方法。meq基因作为MDV特有的致瘤相关基因，在不同毒株间的序列保守性较高，而且其能在感染细胞和转化肿瘤组织细胞中高度表达。因此，本研究基于其上述特点，将其确定为建立的PCR

5、检测方法的靶基因，通过生物软件设计出一对扩增其部分保守序列的引物，建立起一种用于快速诊断魄MDV感染的PCR检测方法。随后，将所建立方法与其他检测MDV感染的‘◆甜Il^◆“PCR方法即实时定量PCR检测方法和132-bpr检测方法，对强毒株攻毒试验中采集的140份组织脏器样品进行检测对比试验。结果显示，总检出率从高到低排列为：实时定量PCR检测方法(100％)、meq基因PCR检测方法(89．28％)、132一切r基因PCR检测方法(79．29％)；meq基因PCR检测方法和132．bpr基因PCR检测方法组织脏器检出率最高的组织脏器为外周淋巴白细胞(P

6、BLs)，分别为100％并EI95％，而检出率最低的组织脏器样品为心脏，分别为80％和65％。实时定量PCR检测方法虽然具有最高的检测准确性，但是其仪器与试剂价格昂贵，造成检测成本过高，不适合于基础实验室的检测应用。132．bpr基因PCR检测方法优点在可以区分MDV强弱毒株，仪器与试剂价格较合理，适合于生产上的大批量样品诊断检测，但存在假阴性的情况，造成检出率偏低；所建立的针对meq基因的PCR检测方法，检测成本合理，而且具有较高的检出率，在样品检测中表现出更好的灵敏度，提高了检测的准确性。综合检测灵敏度、试验耗时和检测成本等多方面对比后得出结论，本课题

7、所建立的meq基因PCR检测方法是一种快速、敏感、简便的MDV感染检测技术。‘-一-关键词：马立克氏病病毒(MDV)meq基因多聚酶链式反应(PCR)实时定量PCR132·bp，基因检出率n—‘一’YTHEDEVELOPMENTANDAPPLICATIONOFPCRDETECTIONMETHODFORMAREK’SDISEASEBASEDONmeqGENEABSTRACTMarek’Sdisease(MD)isahighlycontagiouslymphoproliferativediseasecausedbyMarek’Sdiseasevirus(MDV

8、)，whichcauseslesionneuralandvisce