掺杂玉米茶叶的基因组DNA提取与PCR检测方法建立-论文.pdf

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1、第52卷第22期湖北农业科学V01．52No．222013年11月HubeiAgriculturalSciencesNov．，2013掺杂玉米茶叶的基因组DNA提取与PCR检测方法建立余澍琼，张吉红，赵旭东，陈建国(1．宁波出入境检验检疫局，浙江宁波315012；2．临沂市产品质量监督检验所，山东临沂276004)摘要：根据玉米内源ZEIN基因建立了茶叶中掺杂玉米的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。结果表明，标准CTAB法适合提取茶叶样品基因组DNA，实时荧光PCR的灵敏度能达到0．1％，普通

2、PCR能达到1％，实时荧光PCR是普通PCR的1O倍。两种方法都能达到检测要求。关键词：茶叶(Camelliasinensis)；玉米(0mays)；普通PCR；实时荧光PCR；检测方法中图分类号：Q78；$571．1文献标识码：A文章编号：0439—8114(2013)22—5615—03ExtractionofGenomicDNAfromTeaDopingwithMaizeandEstablishmentofPCRDetectionYUShu-qiong~,ZHANGJi—hong~,ZHA

3、OXu-dong2，CHENJian-guo(1．NingboEntry—ExitInspectionandQuarantineBurean，Ningbo315012，Zhejiang，China；2．LinyiInstituteofProductsOuahySupervisionandInspection，Linyi276004，Shandong，China)Abstract：AccordingtotheendogenousgeneZEINofmaize，twoPCRmethodswerees

4、tablished．TheresultsshowedthatstandardCTABmethodwassuitableforgenomieDNAextractionofmaize．OrdinaryPCRhad1％detectionsensitivity．Thedetectionsensitivityofreal-timePCRwas10timesmorethanthatofordinaryPCR．Twomethodscanmeetrequirementsfordetectingmaizeinte

5、ainfuture．Keywords：tea(Camelliasinensis)；maize(Zeamays)；ordinaryPCR；real—timePCR；detectionmethods目前。我国的茶叶(Camelli0sinensis)年消费量茶叶)揉成条，并增进重实感：或是利用淀粉糊的黏已高达66万t，人均饮茶量0．45kg／年。茶对我国的性，掺人一些沙土、木灰、煤屑等以增重：或上述掺社会历史文化和现实生活都产生了重要影响_1]茶伪兼而有之_5_叶质量安全主要包括茶叶掺假、农药残留、

6、重金属PCR技术具有快速、灵敏、特异性高的特点，污染、有害微生物污染、磁性物和粉尘污染等因已广泛应用于食品、饲料中外源成分的检测。本研究素[z．3]其中茶叶中掺假的问题近年来越发严重．一根据玉米fZe口mays)内源ZEIN基因建立了茶叶中些不法商贩为了获取高额利润在茶叶中掺杂各种掺杂玉米的普通PCR和实时荧光PCR检测方法．谷类物质．以次充好，以假冒真。茶叶掺假的方式以期能够快速、准确地检测出茶叶中掺杂的玉米。有：以类似茶叶的其他植物叶冒充茶叶；在真茶叶1材料与方法中掺人假、次茶叶：晒干饮用过

7、的茶叶重新销售等。此外，茶叶中还出现了掺淀粉、甘薯粉、面粉或1．1材料与仪器其他谷类淀粉加水、加热促成淀粉糊．于茶叶初制茶叶和玉米购自宁波市欧尚超市散装商品(样或再加工过程中加人．其目的或是将末茶重新造品在小型食品加工机中充分加工成细粉)。形．促成条状；或是将粗老茶特别是回笼茶(泡过的DNA聚合酶和dNTPs等PCR试剂购自生工生物工收稿日期：2013—03—29基金项目：宁波检验检疫局科研项目(甬K04—2011)作者简介：余澍琼(1985一)，女，浙江宁波人，助理工程师，硕士，主要从事农产品

8、转基因成分的检测和科研工作，(电话)0574—87022831(电子信箱)yushuqi0ng@I26．com。5616湖北农业科学2013正程(上海)股份有限公司。法提取的基因组DNA的浓度和纯度都要高．但相1．2基因组DNA的提取差不大。称取含有10％玉米的茶叶样品200mg和纯玉2_2茶叶样品普通PCR和实时荧光PCR扩增结米样品20mg分别采用标准CTAB法、改良CTAB果法_8]和试剂盒法提取两种样品基因组DNA．用U一3种提取方式都有清晰而明显的扩增条带．其0080D型生物分光光度计