江蓠总DNA提取及其PCR扩增方法的建立.pdf

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1、热带海洋学报JOURNALOFTROPICALOCEANOGRAPHY2010年第29卷第6期：98-103。海洋生物学jhttp：／／jto．scsio．ac．cn；http：／／www．jto．ac．cnm。。，。么江蓠总DNA提取及其PCR扩增方法的建立李文红，房振峰(广西大学水产系，广西南宁530005)摘要：通过对CTAB法、SDS法和植物基因组提取试剂盒3种方法提取江蓠Gracilaria总DNA的得率比较，并将得到的总DNA用于限制性酶切和PCR扩增反应进行纯度检测，选择出适合江蓠属总DNA

2、的提取方法，建立了江蓠RAPD、ISSR和ITS等遗传多样性和系统学研究的分子生物学方法。实验结果表明，SDS法和植物基因组提取试剂盒均适用于江蓠总DNA的提取；其中SDS法适用于新鲜和冰冻材料的总DNA提取，不仅得率和纯度高，且方法稳定性好，提取时间较短，在本实验中是江蓠总DNA提取的最佳方法。植物基因组提取试剂盒的得率低，但质茸好，操作快速简便，适用于大星新鲜样本总DNA的提取。CTAB法由于相对耗时长且产物稳定性差，不推荐在江蓠中使用。关键词：江蓠Gracilaria；总DNA提取；PCR扩增中图分

3、类号：Q523文献标识码：A文章编号：1009．5470(2010)06．0098—06DNAisolationandPCRamplifiedinGracilariaLIWen-hong，FANGZhen—feng(DepartmentofAquaculture，GuangxiUniversity，Nanning530005。China)Abstract：ThepropertotalDNAisolationmethodsofGracilariawerechosenfromthreepopularmetho

4、dsknownasCTAB，SDS。andcommercialPlantDNAExtractionkitsbycomparingtheiryield，quality。reliability，andtheextractiontimecon—sumed．ThetotalDNAwasappliedtorestrictedenzymedigestionandPCRamplificationtodetectitsquality．ThereactionsofingredientsandprogramsofRAPD，I

5、SSR，andITSwereconstructedbasedonthedetections．TheresultsshowedthattheSDSmethodisthebestmethodamongthethreeforitshighestyieldandfinequalityoftotalDNA，bothgoodforfreshandfrozenGracilariasamples．nottime．consumingandexcellentreliability．ThePlantDNAExtractionK

6、itwasquickanduser-friendlyforthemassfreshsamplesDNAisolationinGracilariathoughitstotalDNAyieldWaslOW．TheCTABmetIlodwasnotrec-ommendedforitstime—consumingandpoorreliability．Keywords：Gracilaria；totalDNAisolation；PCR江蓠Gracilaria属于红藻f-](Rhodophycophyta)，红藻纲(F

7、lorideophyceae)，杉藻目(Gigartinales)，江蓠科(Gracilariaceae)，为温、暖水性种类，除极地外世界各地均有分布。我国已知的32种江蓠属海藻主要分布在南海、东海，黄海种类较少；南海一特别是海南岛，是我国江蓠种质和资源分布中心【Il。江蓠的外形变异幅度很大，即使是同一种类，由于所处的生态环境有异其藻体也会产生不同变化，这给江蓠的准确分类带来很大困难。张峻甫等f2J根据囊果被构造和其他特征，把长期在东南亚一带被误认为江蓠模式种的Gverrucosa更名为真江蓠Gasiat

8、ica；认为细基江蓠繁枝变种Gtenuistipitata(Var．1iui)为细基江蓠Gtenuistipitata的生态变型亚种，其繁枝的形态特征是长期适应池塘环境的结果。台湾的学者原将细基江蓠繁枝变种定名为菊花心江蓠Glichenoides，后来在夏威夷的学术会议上多数学者认为它实际上和细江蓠是同物异名而把菊花心江蓠一名取消{3J。笔者曾经将分子标记技术运用予细基收稿日期：2009．12—10；修订日期：2009．12．